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分子植物育种
(
网络版
), 2013
年
,
第
11
卷
,
第
1014
-
1018
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2013, Vol.11, 1014
-
1018
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
Copyright © 2013 5
th
Publisher 1014
研究报告
Reseach Report
富含多糖的野生西瓜果实
RNA
提取方法研究
刘景安
1,2
,
郭绍贵
2
,
张海英
2
,
任毅
2
,
宫国义
2
,
许勇
2
1.
中国农业科学院蔬菜花卉研究所
,
北京
, 100081;
2.
国家蔬菜工程技术研究中心
,
北京
, 100097
通讯作者：
xuyong@nercv.org
；
作者
分子植物育种
, 2013
年
,
第
11
卷
,
第
3
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0003
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
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引用格式
(
中文
)
：
刘景安等
, 2013,
富含多糖的野生西瓜果实
RNA
提取方法研究
,
分子植物育种
(online), 11(3): 1014-1018 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0003)
引用格式
(
英文
)
：
Liu et al., 2013, Study on the Methods of Total RNA Extraction from Wild Type Watermelon Fruit with Rich Polysaccharides, Fenzi Zhiwu Yuzhong
(online) (Molecular Plant Breeding), 11(3): 1014-1018 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0003)
摘
要
野生西瓜果实富含多糖类物质，果实组织高质量
RNA
提取困难。为解决这一问题，本研究把
SDS
法、改良
CTAB
法和改良
LiCl
沉淀法等三种常规
RNA
提取方法与本研究提出的改良
SDS
法对野生西瓜
PI296341-FR (
Citrullus lanatus subsp.
Lanatus
)
果肉
RNA
提取效果进行了比较和分析。结果表明只有改良
SDS
法能够在保证
RNA
质量和产率的同时有效去除多
糖。与常规
SDS
法相比，改良
SDS
法增加了醋酸钾缓冲液
(5 mol/L, PH 6.0)
和无水乙醇
(1/4
体积
)
共同沉淀多糖的步骤，但醋
酸钾缓冲液用量仅需
1/100
体积。改良
SDS
法提取的总
RNA
完整性、纯度和产率较为理想，
28S rRNA
和
18S rRNA
条带清
晰，无降解；
OD
260nm
/OD
280nm
比值为
1.97
，
OD
260nm
/OD
230nm
比值为
1.91
；
RNA
提取产率为
15~20 μg
•
g
-1
•
FW
-1
，可满足后续
分子生物学实验的要求。
关键词
野生西瓜；多糖；
RNA
提取；改良
SDS
法
Study on the Methods of Total RNA Extraction from Wild Type Watermelon
Fruit with Rich Polysaccharides
Liu Jingan
1,2
, Guo Shaogui
2
, Zhang Haiying
2
, Ren Yin
2
, Gong Guoyi
2
, Xu Yong
2
1. lnstitute of Vegetables and Flowers, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing, 100081, P.R.China
2. National Engineering Research Center for Vegetables, Beijing, 100097, P.R. China
Corresponding author, xuyong@nercv.org ;
Authors
Abstract
For wild watermelon, it’s hard to isolate the high quality RNA from the fruit flesh rich in polysaccharides. Three
normal RNA isolation methods, including SDS lysis, improved CATB lysis and improved LiCl precipitation, accompanying with the
improved SDS lysis method proposed in this study, were evaluated by comparing the efficiency of fruit flesh RNA isolation of wild
watermelon PI296341-FR (
Citrullus lanatus subsp. Lanatus
). The results indicated that only our improved SDS lysis method may be
used to isolate high quality RNA without polysaccharides co-precipitation from wild watermelon fruit flesh rich in polysaccharides.
KAc buffer (5 mol/L, pH 6.0) and absolute alcohol (1/4 volume ratio) were employed to precipitate polysaccharides in our improved
SDS lysis method in comparison with the normal SDS lysis method. It’s worth noticing that only 1/100 volume ratio KAc buffer
should be used here. The integrity, purity and yield of RNA isolated via the improved SDS lysis method were ideal enough. The
bands of 28S rRNA and 18S rRNA were clear and did not degrade. The ratios of OD
260nm
/OD
280nm
and OD
260nm
/OD
230nm
were 1.97
and 1.91, respectively. The yield of RNA was 15~20 μg•g
-1
•FW
-1
. This demonstrates that the RNA isolated via the improved SDS
lysis method could be used for further study on related molecular biological experiments.
Keywords
Citrullus lanatus subsp. Lanatus
; Polysaccharides; RNA extraction; Improved SDS lysis
研究背景
野生西瓜材料
PI296341-FR
属于葫芦科
(
Cucur
-
bitaceae
)
西瓜属的野生种
(
Citrullus lanatus
subsp
.
收稿日期：
2012
年
11
月
30
日
接受日期：
2012
年
12
月
17
日
发表日期：
2013
年
04
月
16
日
基金项目：本研究由国家自然科学基金
(30972015)
和北京市
自然科学基金重大项目
(5100001)
共同资助