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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1338
-
1345
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1338
-
1345
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1342
守性强，主要等位基因在各个地区分布更为均匀。
因此，表现出了较高的遗传多样性。但是，尽管两
种类型
SSR
有所差异，通过两种不同类型
SSR
获
得的材料间遗传距离矩阵之间存在极显著相关，说
明在进行种质资源遗传关系评价时两种类型
SSR
应用效果相似，可根据两种类型引物的特点针对不
同的实验目的选择相应的引物。
3
材料与方法
3.1
实验材料
实验材料共
68
份，其中
67
份为采集于广东不
同地区的割手密，
1
份为采集地为福建惠安的福建
割手密
(
表
1)
。
3.2 DNA
提取
采用
CTAB
法，参照
Besse
等方法
(Besse et al.,
1996)
，利用幼嫩叶片提取
DNA
。通过
0.8%
的琼脂
糖凝胶电泳测定
DNA
质量，用紫外分光光度计测
量
DNA
浓度。
3.3 SSR
分析
本实验共采用
20
对
SSR
引物进行分析。根据
国际甘蔗生物技术学会
(International Consortium of
Sugarcane Biotechnology)
公布的
SSR
的引物信息选
择了
10
对基因组
SSR (Cordeiro et al., 2000; Pan,
2006)
。根据
Pinto
等
(2004)
研究选择了
20
对
EST-SSR
，经过
PCR
与聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，
筛选出
10
对条带清晰、分子量适中的引物
(
表
2)
。
PCR
扩增程序为反应体系为每
20 μL
反应体积
中含有
DNA
模板
50 ng
、
10
×
Buffer 2.0 μL
、
MgCl
2
2.0 mmol/L
、上游引物和下游引物各
0.25 mmol/L
、
dNTP 0.2 mmol/L
、
Taq
酶
1.5 U
。反应程序为：
95
℃
下预变性
5 min
后，然后进行
30
个循环，每个循环
包括：
95
℃
1 min
、
55
℃
30 s
、
72
℃
1 min
，最后
在
72
℃下延伸
10 min
。扩增产物进行银染显色
(Bassam et al., 1991)
。
3.4
统计分析
统计每对引物扩增的带条数，有带记作
l
，无
带记作
0
。应用
PowerMarker V3.0
软件
(Liu and
Muse, 2005)
统计每个引物上的多态性条带数、遗传
多样性指数
(Weir, 1996)
和平均多态性信息含量
(Botstein et al., 1980)
，计算各个材料间的
Nei's
遗传
距离
(Nei, 1973)
，然后再根据各个材料间的遗传距
离进行
UPGMA
聚类分析。
作者贡献
樊丽娜是本研究的实验设计和实验研究的主要执行
人；李昱，罗青文，劳方业，王勤南，何慧怡及陈月桂参实
验研究与数据分析；邓海华、李奇伟参与实验设计，试验结
果分析；齐永文是项目的构思者及负责人，指导实验设计，
数据分析，论文写作与修改。全体作者都阅读并同意最终
的文本。
致谢
本研究由国家自然科学基金
(30800700)
、国家现代农业
产业技术体系
(CARS
-
20
-
1
-
4)
、广东省科技计划
(2011B06-
0400019)
共同资助
。
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