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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1323
-
1330
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1323
-
1330
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1328
表
2 17
对
SSR
核心引物在
F
2
单株中谱带分离比例表
Table 2 Separate ratio of SSR markers of the 17 pairs of core primers
图谱带型
Types of the
banding pattern
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17
Ⅰ
14 12 13 11 13 11
3 12
8 10 12
6
0
0
0
0
0
Ⅱ
11 12 13 12 12 17 16 11 11 11 13 15 44 44 43 44 43
Ⅲ
19 20 18 21 18 16 25 21 25 23 19 23
0
0
1
0
1
其他
Other
1
合计
Total
44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44 44
性的引物在
F
2
群体中扩增，“亲本
1:
亲本
2:
杂交型”
分离比例如表
2
。由于个体数目偏少，尽管不能严
格按
1:1:2
的比例，但有接近这个比例的趋势。对
一个
SSR
位点的分离为
3
种类型的基因型，但对于
多个位点而言，分离后植株间杂合程度非常高。
1.5 F
1
、
F
2
和常规棉的区别
F
1
杂交种在共显性引物的扩增下，每个植株均
表现为共显性，谱带类型为
3
型，整齐一致；在非
共显性引物下，均为一致的简单带型。
F
2
群体在不
同的引物扩增下基本上每一个植株的谱带都不一
致，而且绝大多数为杂合体。常规棉在不同的引物
扩增下，每个植株均表现为简单带型
1
或
2
，不会
出现共显带
3
。根据不同植株谱带的结构可以判别
F
1
、
F
2
和常规棉。通过单株图谱的比对，也能初步
分析出棉种的掺杂的成分。
2
讨论
以
F
1
纯度好为前提，研究分子水平下
F
2
的杂
合状况，在多个引物的扩增下，
F
2
分离株在基因水
平上是非常杂合的。基因多位点的差异会导致表型
性状的不一致，田间纯度差，经济性状分离，造成
产量、品质不一致。生产上
F
2
的大量使用，使杂交
棉发挥不了应有的优势，导致杂交棉在推广中受到
负面的影响。
棉种的真实性室内快速鉴定，以及
SSR
标记纯
度的检测，有利于种子公司的质量控制，也有利于
种子监管部门的有效管理。棉花品种指纹图谱的构
建，有利于育种家对棉种产权的保护。
在各级棉花区域试验过程中，有少数育种家急
于求成用低世代材料参试，这样的品种一旦获得新
品种认定，如果推广应用，很容易退化，给棉农带
来损失。因此，经过
SSR
纯度检测，对纯度过低的
品种实行淘汰制，是十分必要的。特别是有的育种
家用
F
1
替代常规棉参试，造成不公平竞争，或使用
重复品种参试，这种情况只有对参试材料进行指纹
图谱的比对，才能得到有效的控制。我们期望建立
一套
SSR
核心引物鉴别参试的每一个材料建设一
个公平竞争的品种参试平台。
3
材料与方法
3.1
棉花材料
供试材料是国家棉花区试提供的参试品种邯
6402 F
1
，
2011
年
4
月
27
日种植于中国农科院棉花
研究所东场试验地，在成株期田间取样
24
株；
2011
年收获邯
6402 F
2
种子，
2012
年
3
月种于生长箱内，
取幼苗
44
株。
3.2DNA
提取的方法
参考
Paterson
等的方法
(Paterson et al., 1993)
，
结合本实验室改进后的
CTAB
法
(
付小琼等
, 2011)
，
2011
年用真叶提取
DNA
，
2012
年用幼苗的子叶提
取
DNA
。应用
17
对
SSR
核心引物
(
表
3)
检测
F
1
的
纯度并构建指纹图谱
(
中国农科院棉花研究所
,
2011)
，构建
F
2
44
个分离株的指纹图谱。
3.3
基因杂合和纯合的判别方法
呈共显性引物的谱带为三种带型，定义三种带
型为
1
、
2
和
3
，其中
1
和
2
为简单带型，为亲本类
型，
3
为共显带型，凡是在不同引物上有
3
的棉株，
表明在这些位点上是杂合的，可以判断这株棉花为
基因杂合株，在所有引物的扩增谱带上均没有
3
，
表明这株棉花的基因是相对纯合的。