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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1497
-
1504
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1497
-
1504
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1500
图
4
BnPPR636
基因全长
cDNA (
泳道
1)
与基因组
DNA (
泳道
2)
扩增结果
注
: M: 2000 bp DNA ladder marker
Figure 4 Amplification of
BnPPR636
full length cDNA (Lane 1)
and genomic DNA (Lane 2)
Note: M: 2000 bp DNA ladder marker
菜
P2
克隆上的一个未知功能蛋白聚在一起，亲缘关
系最近；与同为十字花科的拟南芥的
PPR
蛋白亲缘
关系次之，聚在较近位置的还有油菜
Ogura
细胞质雄
性不育系统的恢复基因和萝卜的恢复基因，而与禾
本科的水稻、高粱、大麦的
PPR
蛋白亲缘关系逐渐变
远
(
图
5)
。玉米与水稻的
PPR
聚在一起，蓖麻与高粱
的
PPR
聚在一起，而杨树、卷柏和大麦的
PPR
蛋白则
被单独分开。通过进化树可以发现，
PPR
蛋白在进化
上虽然较为保守，但也出现了分化。该基因的系统
发育进化树基本符合物种的进化规律。
1.4
BnPPR636
的组织特异性表达分析
采用半定量
RT-PCR
法检测
BnPPR636
基因在
根、茎、叶、花和角果
5
个不同组织中的相对表达量，
结果表明
BnPPR636
在花中的表达量最高，在根中
的表达量次之，角果与叶片的表达量相对较弱，在
茎中的表达量最低
(
图
6)
。说明该基因可能与花的发
育有关，同时也参与根和角果的生理活动。
图
6
BnPPR636
的组织特异性表达分析
Figure 6 Tissue specific expression of
BnPPR636
1.5
BnPPR636
启动子的扩增
根据
BnPPR636
的
5'
末端
DNA
序列，设计三条特
异引物进行
TAIL-PCR
，通过
3
轮热不对称
PCR
反应，
第三轮的
PCR
产物在
1.2%
的琼脂糖凝胶上电泳，获
得长度约为
1 100 bp
的
DNA
片段
(
图
7)
。序列分析发
现其实际长度为
1 145 bp
。利用在线启动子分析软件
(http://www.fruitfly.org/seq_tools/promoter.html)
预测
结果表明此片段具备启动子的基本特征。
图
7
BnPPR636
启动子扩增电泳图
Figure 7 PCR amplification of
BnPPR636
promoter
利用
PLACE (http://www.dna.affrc.go.jp/PLACE/
signalscan.html)
预测分析核心启动子区域和有关的
顺式作用元件结合位点，结果显示
1 145 bp
的区域中
含有多种启动子通用元件
(
图
8)
，如
TATA-box
、
TSS
图
5
不同植物种与
BnPPR636
同源的
PPR
蛋白进化分析
Figure 5 Phylogenetic analysis of PPR proteins homologous to BnPPR636 in various plant species