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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1458
-
1463
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1458
-
1463
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1460
图
2
部分
T
0
代转基因植株
AtNPR1
基因的
PCR
检测
注
: M: DL2000 marker; 1: pAC-NPR1; 2:
扬麦
12
号
; 3~17:
转基因植株
Figure 2 PCR analysis of
AtNPR1
gene in part of T0 transgenic plant
Note: M: DL2000 marker; 1: pAC-NPR1; 2: Yangmai12; 3~17: Transgenic plants
麦纹枯病的抗性。
采用
18S rRNA
作为内参基因，对转基因对照
扬麦
12
和
14
个转基因株系
AtNPR1
基因的半定量
RT-PCR
分析结果发现，
R3
、
R4
、
R7
、
R8
、
R9
、
R10
和
R13
等
7
个株系扩增出
635 bp
的亮带；
R2
、
R14
和
R15
等
3
个株系扩增出
853 bp
和
1165 bp
两条带；
R6
和
R11
等
2
个株系只有微量表达，
R5
和
R12
等
2
个株系没有扩增条带
(
图
3)
。将扩增的各个
DNA
条带回收、测序和
Blast
分析结果显示，
635 bpDNA
条带为内含子正常剪切和表达的
AtNPR1
基因片段；
853 bp
条带为
108 bp
和
110 bp
的
2
个内含子未剪切
的表达片段；
1 165 bp
条带为如图
4
所示插入基因发
生复杂片段重排的表达片段。
正常表达
(
切除内含子
)
的
7
个株系中，
R9
的表达
最强，其次为
R3
、
R4
和
R13
，
R7
、
R8
和
R10
的表
达相对较弱。
图
3
转基因株系
AtNPR1
基因的半定量
RT-PCR
分析
注
: M: 100 bp DNA ladder marker; R1:
扬麦
12
号
; R2-R15
转基因株系
; R2, R14
和
R15:
来自
S1-1; R3
和
R4
来自
S44-1; R6
和
R11
来自
S89-1;
其余来之不同转基因植株
Figure 3 Semi-quantitative RT-PCR analysis of
AtNPR1
gene in transgenic lines
Note: M: 100 bp DNA ladder marker; R1: Yangmai12; R2-R15: Transgenic lines; R2, R14 and R15 from S1-1; R3 and R4 from
S44-1; R6 and R11 fromS89-1; The other transgenic lines derived from different transgenic plant
图
4
转基因植株
S1-1
中的
AtNPR1
基因片段重排
注
:
箭头表示片段方向
;
方框表示未知序列
;
上排数字表示重排基因片段的位置
;
下排数字为原基因中片段位置
Figure 4 The rearrangement of
AtNPR1
fragments in transgenic plant S1-1
Note: The arrows indicate the direction of fragments; The boxes indicate unknown DNA sequences; The number of up line indicates
the location of fragments in the rearranged gene; The number of lower line indicates the location of fragments in the original gene