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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1408
-
1413
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1408
-
1413
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1408
研究报告
Research reportr
利用实时定量
PCR
技术研究盐胁迫下
107
杨持家基因表达稳定性
周祥明
,
宋建
,
王姝
天津市农业生物技术研究中
,
天津
, 300384
通讯作者
: mittonzhou@163.com
作者
分子植物育种
, 2012
年
,
第
10
卷
,
第
56
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0056
收稿日期：
2012
年
08
月
26
日
接受日期：
2012
年
10
月
07
日
发表日期：
2012
年
12
月
14
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
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,
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引用格式
(
中文
)
：
周祥明等
, 2012,
利用实时定量
PCR
技术研究盐胁迫下
107
杨持家基因表达稳定性
,
分子植物育种
(online) Vol.10 No.56 pp.1408-1413 (doi:
10.5376/mpb.cn.2012.10.0056)
引用格式
(
英文
)
：
Zhou et al., 2012, Gene Expression Stability of Housekeeping Genes in Poplar Clone 107 under Salt Stress by Real Time PCR, Fenzi Zhiwu Yuzhong
(online) (Molecular Plant Breeding) Vol.10 No.56 pp.1408-1413 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0056)
摘
要
以
107
杨盐胁迫不同时间和对照为试材，利用实时定量
PCR
技术研究
9
个杨树持家基因在盐胁迫和对照条件下的表
达稳定性，通过
geNorm
软件分析选择最佳内参基因。结果表明：
6
个持家基因的扩增效率在
89.93%~104.68%
之间，且线性
回归拟合度
R
2
在
0.987 6~0.999 9
之间；另外，经
geNorm
软件分析，盐胁迫条件下，持家基因表达稳定性为
EIF 4B=UBQ>CYP>
ACT
Ⅱ
>UBQL>TUB
，
EIF 4B
和
UBQ
适合作为内参基因；对照条件下，持家基因表达稳定性为
EIF 4B=UBQL>ACT
Ⅱ
>CYP>
UBQ>TUB
，
EIF 4B
和
UBQL
适合作为内参基因。
关键词
旱树；盐胁迫；实时定量
PCR
；游离脯氨酸含量；持家基因；基因表达
Gene Expression Stability of Housekeeping Genes in Poplar Clone 107 under Salt
Stress by Real Time PCR
Zhou Xiangming , Song Jian , Wang Shu
Tianjin Research Center of Agricultural Biotechnology, Tianjin, 300384 P.R. China
Corresponding author, mittonzhou@163.com
Authors
Abstract
Gene expression stabilities of nine housekeeping genes in Poplar Clone 107 ( Populus
×
euramericana ' Neva' ) under
different durations of salt stress treatments and control were detected by Real-time PCR; the best reference genes were screened
through the geNorm program. The results indicated that amplification efficiency of six housekeeping genes were from 89.93%
to 104.68%
，
and fitting degree of linear regression (R
2
) were from 0.987 6 to 0.999 9
。
Under the conditions of the salt stresses, the
order of 6 housekeeping genes expression stabilities from high to low were
EIF 4B=UBQ>CYP>ACT
Ⅱ
>UBQL>TUB
，
and the genes,
EIF 4B
and
UBQ
, should be suitable as reference genes. Whereas under the control condition, the order of six housekeeping genes
expression stabilities were
EIF 4B= UBQL>ACT
Ⅱ
>CYP>UBQ>TUB
，
and
EIF 4B
and
UBQL
could be used as reference genes
Keywords
Upland rice; Drought resistance; Root trait; Free proline content; SOD activity
随目前，关于植物胁迫机制的研究多数是通过
基因表达分析
(Bezier et al., 2002; Dean et al., 2002)
，
其有助于更好地了解植物胁迫响应机制。基因表达
分析需要具有敏感、精确、可重复测量特异
mRNA
的方法。与
Northern blot
、
RNA
酶保护分析、原位杂
交和半定量
RT-PCR
等传统的转录分析方法比较，实
时定量
PCR (quantitative real time PCR)
为目前检测
基因表达最可靠的方法
(Bustin, 2000)
。该方法具有
以下优点：
(1)
高度敏感、无
PCR
后处理及动态范围广，在
表达丰度差异大的基因间可直接进行比较；
(2)
使用
方便，无需放射性同位素；
(3)
所需材料起始量少
(Jian et al., 2008 )
。
但是，
qRT-PCR
整个实验过程会因
RNA
的质量
和数量、
cDNA
合成效率以及
PCR
扩增的差异而导
致结果严重偏差
(
涂礼莉等
, 2007,
科学通报
, 52(20):
2379-2385)
。为避免偏差，
qRT-PCR
需要内对照基因
(Internal control gene)
为参考基因
(Reference gene)