Basic HTML Version
分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1171
-
1178
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1171
-
1178
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1177
图
10
京科糯
120
其亲本的荧光检测结果
(
引物
:phi053k2)
注
: A
为
GeneMapper v3.7
分析结果
; B
为
GeneMarker-BMSTC v1.0
分析结果
Figure 10 PCR products of Jingkenuo120 and their parents detected with fluorescence detection (Primer: phi053k2)
Note: A: The analysis result of GeneMapper v3.7; B: The analysis result of GeneMarker-BMSTC v1.0
MgCl
2
，
1
单位
Taq
酶，反应总体积为
20 μL
。每对引
物中的一条
5'
端用荧光染料标记，选用
PET
、
NED
、
VIC
、
FAM
四种荧光染料
(Applied Biosystems, USA
公
司合成
)
。
PCR
反应程序：
94
℃预变性
5 min
，
1
个循
环；
94
℃变性
40 s
，
60
℃退火
35 s
，
72
℃延伸
45 s
，
共
35
个循环；
72
℃延伸
10 min
；
4
℃保存。引物选用
适于玉米
DNA
指纹分析的
40
核心
SSR
引物
(
即
20
对基本核心引物
+20
扩展核心引物
) (
王凤格和赵久然
,
2011,
中国农业科学技术出版社
, pp.189-191)
。
3.2.3
检测扩增产物
毛细管电泳：
PCR
产物在毛细管荧光电泳系统
AB 3730XL DNA
分析仪
(Applied Biosystems, USA)
上进行
10
重电泳，即按照扩增片段大小和荧光颜色
差异将
10
对引物的扩增产物混合在一起电泳。在
96
孔电泳板的单个孔中分别加入
1.5 μL 10
对引物
PCR
产物的混合物，
9 μL
甲酰胺，
0.12 μL
分子量内标
(GeneScan
TM
-
500 LIZ, Applied Biosystems, USA)
。
95
℃
变性
5 min
，
4
℃保存
10 min
，
1 000 rpm
离心
1 min
后，于
AB 3730XL DNA
分析仪上进行电泳。预电
泳时间为
15 kV
，
2 min
；电泳时间为
15 kV
，
20 min
。
用
Date Collection v1.0
软件收集原始数据。
3.2.4
数据分析
用
GeneMapper v3.7
和
GeneMarker-BMSTC v1.0
软件
(
由北京市农林科学院玉米研究中心与北京华
生恒业科技有限公司基于玉米共同研发
)
分别对
11
组供试材料的
40
对
SSR
引物的原始数据进行分析
和校正。
作者贡献
王蕊是本研究的实验设计和实验研究的执行人；田红
丽参与实验设计，试验结果分析，指导论文的写作与修改；
王凤格，赵久然是项目的构思者及负责人，指导实验设计与
论文修改；易红梅，王璐参与实验研究；李楠，霍永学提供
软件相关指导。全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
感谢北京华生恒业科技有限公司的李欣，江彬在软件