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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1145
-
1150
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1145
-
1150
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1148
图
4
引物
26
大白菜杂交种纯度鉴定
注
: 1
号
, 2
号
, 3
号
, 5
号
, 9
号
, 10
号品种的大白菜杂交种种子纯度鉴定结果
, 1, 2, 3
分别为
1
号品种大白菜的母本
,
杂交种
,
父
本
; 4, 5, 6
分别为
2
号品种大白菜的母本
,
杂交种
,
父本
; 7, 8, 9
分别为
3
号品种大白菜的母本
,
杂交种
,
父本
; 10, 11, 12
分别
为
5
号品种大白菜的母本
,
杂交种
,
父本
; 13, 14, 15
分别为
9
号品种大白菜的母本
,
杂交种
,
父本
; 16, 17, 18
分别为
10
号品
种大白菜的母本
,
杂交种
,
父本
Figure 4 Results of purity identification of Chinese Cabbage hybrids by primer No.26
Note
：
Results of purity identification of Chinese Cabbage of No.1, 2, 3, 5, 9, 10 hybrids, 1, 2, 3 were maternal parent, hybrid,
paternal parent of No.1 hybrid respectively; 4, 5, 6 were maternal parent, hybrid, paternal parent of No.2 hybrid respectively; 7, 8, 9
were maternal parent, hybrid, paternal parent of No.3 hybrid respectively; 10, 11, 12 were maternal parent, hybrid, paternal parent of
No.5 hybrid respectively; 13, 14, 15 were maternal parent, hybrid, paternal parent of No.9 hybrid respectively; 16, 17, 18 were
maternal parent, hybrid, paternal parent of No.10 hybrid respectively
表
2
两种方法纯度鉴定结果
Table 2 Results of two methods for purity identification
杂交种编号
EST-SSR
纯度鉴定结果
(%)
田间纯度鉴定结果
(%)
No. of hybrid
Results of purity by EST-SSR (%)
Results of purity with planting (%)
1
100
100
2
98.33
98.33
3
96.67
98.33
4
96.67
98.33
5
100
100
6
100
100
7
93.33
96.67
8
93.33
96.67
9
93.33
96.67
10
96.67
98.33
3
试验材料与方法
3.1
试验材料
以
10
份市售大白菜杂交种及其双亲为试验材
料，由天津科润蔬菜研究所提供，
10
份大白菜杂交
种品种名称见表
3
。
3.2
试验方法
3.2.1 EST-SSR
引物设计与合成
通过
GenBank
上公布的大白菜
EST
序列信息，
应用
CMD SSR Server (http://www.cottonmarker.org/
cgi-bin/cmd_ssr)
在线设计软件，共设计了
30
对核心
引物，引物由上海生工合成。
3.2.2 DNA
提取
利用改良
CTAB
法提取大白菜叶片基因组
DNA (
王永等
, 2008)
。将获得的植物组
DNA
用
1%
的琼脂糖凝胶电泳检测。
3.2.3
引物筛选
以大白菜杂交种及其父本和母本的基因组
DNA
为模板，分别对
30
对
EST-SSR
引物进行扩增，
扩增产物用
8%
聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离、染
色，筛选杂交种带型为父母本互补的引物。
3.2.4 PCR
扩增体系及程序
PCR
扩增反应的总体积为
10 μL
，扩增反应体
系为：
2
×
GoTaq
®
Master Mixes 5 μL
，上游和下游
引物
10 μmol/L
各
0.25 μL
，供试品种大白菜基因组
DNA
模板，浓度
50 ng/μL
，
1 μL
，双蒸水补足
10 μL
；
PCR
反应程序为
94
℃预变性
5 min
，
35
个扩增循环