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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1145
-
1150
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1145
-
1150
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
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息量大、遗传性稳定、检测速度快、操作简便等突出
优点在多种鉴定方法中占据了较大优势，并且也得到
了广泛应用
(
李淑娟
, 2003;
田雷等
, 2001)
。
EST-SSR
标记是分子标记鉴定方法之一，随着
GenBank
上公布的常见物种的
EST
序列信息日渐丰
富，利用
EST
数据库开发
SSR
引物较其它分子标记
方法更加便捷、信息量大、花费低、效率高，同时
也具备
SSR
标记的共显性、多态性高、实验程序简
单等优点，较适合于农户育种的需要
(
张晗等
, 2010)
。
本研究以
10
份市售大白菜杂交种及其双亲为
试验材料，通过
GenBank
数据库上公布的大白菜
EST
序列，设计合成引物，通过比较杂交种及双亲
的特征谱带，筛选杂交种呈现双亲共显性的互补带
型的引物，建立准确快速的
EST-SSR
标记技术鉴定
大白菜杂交种种子纯度的检测方法，为大白菜杂交
种种子纯度分析提供理论基础。
1
结果与分析
1.1
大白菜叶片基因组
DNA
提取方法
利用改良
CTAB
方法提取大白菜叶片基因组
DNA
，用
1%
的琼脂糖凝胶电泳检测结果见图
1
。
从图中可以看出，所提取的基因组
DNA
主带清晰，
整齐一致，没有明显降解，可用于下一步
PCR
扩增。
图
1
大白菜基因组
DNA
电泳图
注
: 1~10: 10
份大白菜杂交种
Figure 1 Electrophoretogram of Chinese cabbage genome
Note: 1~10: 10 Chinese Cabbage hybrids
1.2
引物筛选结果
利用
EST-SSR
标记技术对天津科润蔬菜研究
所提供的大白菜杂交种及其双亲进行种子纯度鉴
定，通过合成的
30
对核心引物，比较杂交种及双
亲特征谱带的差异，筛选杂交种呈现双亲共显性的
互补带型的引物，其中
7
对引物出现杂交种带型为
双亲的互补带型，可用于大白菜杂交种种子纯度的
鉴定，仅应用其中
3
对引物即可覆盖
10
个品种的
大白菜杂交种种子纯度的鉴定。引物序列见表
1
，
应用
3
对引物对
10
个品种大白菜进行纯度鉴定的
图谱如图
2
、图
3
、图
4
所示。
1.3
利用筛选到的
3
对引物进行田间大白菜纯度鉴定
对
10
份大白菜杂交种进行田间随机取样，每
个品种的大白菜各取单株
60
株，利用嫩叶进行
DNA
提取，应用筛选得到的
3
对
EST-SSR
引物，
鉴定每个品种大白菜的纯度，并与田间形态观察结
果对比，从而确定引物的适用性，两种方法纯度鉴
定结果如表
2
所示。
2
讨论
目前对于种子纯度的鉴定方法已经发展到分
子水平，分子标记技术可以直接反应
DNA
水平上
的差异，因此已成为种子纯度鉴定的主要发展趋
势。
DNA
分子标记技术主要包括：扩增片段长度多
态性
(AFLP)
、随机扩增多态性
DNA (RAPD)
、限制
性片段长度多态性
(RFLP)
、简单重复序列
(SSR)
等
方法。其中，
AFLP
虽然稳定性和重复性较高，但
技术本身对
DNA
的纯度和内切酶的质量要求严格，
在应用上收到了限制；
RAPD
检测受环境条件影响
较大且稳定性和重复性欠缺；
RFLP
特异性强、准
确性高，但由于应用到探针标记，价格较高，难以
普及。而
SSR
标记不受环境条件影响，多态性高，
重复性稳定，且价格低廉，操作简便，同时是共显
性标记，因此已被杂交种纯度鉴定广泛应用。
而基于近年来
GenBank
上公布的常见物种的
EST
序列信息日渐丰富，且获取简便，没有任何费
用，因此利用
EST
数据库开发
SSR
引物，不仅保
留了
SSR
标记的所有特点，而且凸显了其便捷、信
息量大、花费低、效率高等优势，适合于技术的推
广和普及。目前
EST-SSR
标记已经应用于水稻、
葡萄、小麦、黑麦、大麦和扁桃、玉米、甘蔗等
(Cho
et al., 2000; Nicot et al., 2004; Thiel et al., 2003; Xu et
al., 2004; Cordeiro et al., 2001;
杨春霞等
, 2011)
植物
进行分子连锁图谱构建和遗传多样性分析。因此，
EST-SSR
分子标记在蔬菜类作物和其他作物的遗传
图谱构建、比较基因作图、物种亲缘关系鉴定、遗
传多样性研究、品种鉴定、新基因的发掘等方面有
很大的应用潜力
(
葛佳等
, 2005)
。
本研究利用
EST-SSR
分子标记技术对大白菜
进行种子纯度鉴定，以
10
份大白菜杂交种及其双
亲为试验材料，用
30
对
EST-SSR
引物进行筛选。
通过筛选应用其中
3
对引物可对
10
份大白菜的全
部品种进行纯度鉴定，即在杂交种
F
1
代中均产生与