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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1012
-
1016
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1012
-
1016
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1012
研究报告
A Letter
辣椒叶片原生质体分离及愈伤组织形成
刁卫平
,
王述彬
,
刘金兵
,
潘宝贵
,
戈伟
江苏省农业科学院蔬菜研究所
,
南京
, 210014
通讯作者
: wangsbpep@163.net;
作者
分子植物育种
, 2012
年
,
第
10
卷
,
第
2
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0002
收稿日期：
2011
年
12
月
31
日
接受日期：
2012
年
01
月
10
日
发表日期：
2011
年
01
月
18
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
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,
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引用格式
(
中文
)
：
刁卫平等
, 2012,
辣椒叶片原生质体分离及愈伤组织形成
,
分子植物育种
(online) Vol.10 No.2 pp.1012-1016 (doi: 10.5376/mpb. cn.2012.10.0002)
引用格式
(
英文
)
：
Diao et al., 2011, Protoplast Isolation from Pepper Leaves (
Capsicum annuum
L.) and Callus Formation, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant
Breeding) Vol.10 No.2 pp.1012-1016 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0002)
摘
要
本文以辣椒细胞质雄性不育系
21A
叶片为试验材料，对原生质体分离过程中的若干因素，如酶液组成、酶解时间、
低温预处理、纯化时的离心转速及时间进行了比较分析，以探讨辣椒叶片原生质体分离的最佳条件及其愈伤组织形成。研究
结果表明，辣椒叶片在
4
℃低温预处理
12 h
后，经酶液
CPW+9%
甘露醇
+0.1%MSE+0.2%PVP+1.0%
纤维素酶
+0.5%
离析酶
+0.2%
果胶酶在
27
℃，转速为
50 r/min
的摇床上酶解
4 h
后可获得大量原生质体。纯化时，适当提高离心转速的短时间离心
有利于高产量原生质体的获得，以
800 r/min
离心
8 min
效果最好。纯化的原生质体稀释后培养在含
6-BA
的
KM8P
培养基
上，
48 h
后可见第一次细胞分裂，
1
个月后可获得愈伤组织。
关键词
辣椒
;
原生质体
;
愈伤组织
Protoplast Isolation from Pepper Leaves (
Capsicum annuum
L.) and Callus
Formation
Diao Weiping , Wang Shubin , Liu Jinbing , Pan Baogui , Ge Wei
Institute of Vegetable Crop, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing, 210014
Corresponding author, wangsbpep@163.net;
Authors
Abstract
In order to figure out the optimum conditions of protoplast isolation of pepper leaves and callus formation, we employed
true leaves of pepper cytoplasm sterile line 21A as experimental materials to analyze some influencing factors on isolation of
protoplasts and callus formation, such as enzymetic composition, enzymetic digesting time, low temperature pretreating , speed and
time of centrifugation for protoplast purifying. The results showed that a great lots of protoplasts could be obtained by enzymic
dissolved in the CPWwith 9% Mannitol, 0.2% PVP, 0.1% MES, 1.0% Cellulase, 0.5% Macerozyme and 0.2% Pectolyase and
incubated on constant temperature shaker with 50 r/min at 27
℃
for 4 h , prior to pre-treating for 12 h in 4
℃
. In the process of
purification, increasing rotating speed for short-time centrifugation will facilitate to yield the protoplasts the best rotating speed and
time would be 800 r/min for 8 min. The purified protoplasts cultured on KM8P medium containing 6-BA would come out with the
first cell division after 48 h incubation and with visible micro callus after one month later.
Keywords
Pepper (
Capsicum annum
L.); Protoplast; Callus tissue
研究背景
辣椒
(
Capsicum
spp.)
是我国第二大蔬菜作物，
作为常异花授粉作物，具有很强的杂种优势。利用
细胞质雄性不育
(Cytoplasmic male sterility, CMS)
系
进行辣椒杂交种生产，具有省去人工去雄、降低成
本、提高种子纯度和保证种子质量等优点。然而，
当前我国辣椒生产上利用
CMS
进行杂种优势育种
中主要存在的问题是缺乏优良的
CMS
系。由于
CMS
性状为母性遗传，通过有性杂交再回交的方法
转移该性状往往需要
6~10
年的时间，这无疑限制
了辣椒
CMS
系的选育进程。
原生质体培养为开展体细胞杂交提供了新的
途径，通过不同类型的原生质体融合可以在一定程
度上克服传统育种方法的不足。而利用原生质体融
合技术可以快速实现胞质基因的转移，获得更多基
因型的杂种，缩短
CMS
性状转育时间。自
Zelcer