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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1122
-
1126
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1122
-
1126
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1122
研究报告
Research Report
SRAP
分子标记在大豆抗豆卷叶螟研究中的应用
孙祖东
,
龙继凤
,
唐兴富
,
杨微
广西作物遗传改良生物技术重点实验室
,
广西农业科学院经济作物研究所
,
南宁
, 530007
通讯作者
: sunzudong@hotmail.com;
作者
分子植物育种
, 2012
年
,
第
10
卷
,
第
16
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0016
收稿日期：
2012
年
03
月
01
日
接受日期：
2012
年
03
月
24
日
发表日期：
2012
年
04
月
30
日
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引用格式
(
中文
)
：
孙祖东等
, 2012, SRAP
分子标记在大豆抗豆卷叶螟研究中的应用
,
分子植物育种
(online) Vol.10 No.16 pp.1122-1126 (doi: 10.5376/mpb. cn.2012.10.0016)
引用格式
(
英文
)
：
Sun et al., 2012, Application of SRAP Marker in Soybean Resistance to Bean Pyralid (
Lamprosema indicata
Fabricius), Fenzi Zhiwu Yuzhong (online)
(Molecular Plant Breeding) Vol.10 No.16 pp.1122-1126 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0016)
摘
要
相关序列扩增多态性
(SRAP)
是一种新型的分子标记，该标记操作简便，具有高度共显性，在基因组中分布均匀，
便于克隆测序目标片段，可用于基因定位，基因克隆，遗传图谱构建等。
SRAP
分子标记能成功应用到大豆作物研究中前提，
必需要建立起一个优良稳定有效的
SRAP-PCR
反应体系，以便确定
SRAP
标记结果是有效可信的。本研究建立一个有效稳
定优良的
SRAP-PCR
体系，即
20 μL
的反应体系中各组分为：
Mg
2+
浓度为
2.0 mmol/L
，各
dNTP
的浓度
0.20 molm/L
，
Taq
酶为
1.5 U
，上下游引物的浓度均为
0.5 μmol/L
，
DNA
为
50 ng
。本研究设计了
27
个正向引物，
40
个反向引物，两两组合后
有
1 080
对引物组合，研究结果显示在
12
份抗感大豆材料具有多态性的引物组合有
516
对，是所有引物组合的
47.8%
，在
可扩增出产物的引物组合中占
60.6%
。
关键词
大豆
;
豆卷叶螟
;
相关序列扩增多态性
;
分子标记
Application of SRAP Marker in Soybean Resistance to Bean Pyralid
(
Lamprosema indicata
Fabricius)
Sun Zudong , Long Jifeng , Tang Xingfu , Yang Wei
Guangxi Crop Genetic Improvement and Biotechnology Labouatory, Cash Crop Research Institute, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning,
530007
Corresponding author: sunzudong@hotmail.com ;
Authors
Abstract
SRAP (Sequence-related Amplified Polymorphism) is a new technique for molecular marker. It is simple, highly
codominant, dependable, distributed evenly in genome and easy to sequence the selected bands. This technique has been used in gene
localization, gene cloning and the construction of genetic map and so on. In this study, SRAP-PCR reaction system and amplification
procedure for soybean were established to ensure the reliablity of SPAP marker. That is the basis for successfully applying SRAP
marker into the research on soybean. PCR reaction was carried out in a total volume of 20 μL containing 2.0 mmol/L Mg
2+
, 0.20
mmol/L dNTP, 1.5U
Taq
DNA polymerase, 0.5 μmol/L upstream and downstream primers and 50 ng template DNA. In this study, 27
forward primers and 40 reverse primers were designed. Totally 1 080 pairs of primers were generated in 12 varieties of soybean
materials . Among them 516 pairs of primers are polymorphic and account for 47. 8% of all the pairs of primers and 60.6% of the
primer pairs which can amplify bands.
Keywords
Soybean; Bean pyralid; SRAP; Molecular markers
研究背景
SRAP
即相关序列扩增多态性
(sequence-re-
lated amplified polymorphism)
，是一种基于
PCR
反
应的新型分子标记系统，于
2001
年由美国加州大
学蔬菜系
Li
与
Quios (2001)
开发出来的，也被称为
SBAP
即基于序列扩增多态性
(sequence-based
amplified polymorphism)
。
这种新型分子标记系统
(sequence-related
amplified polymorphism)
的分子标记引物由一段核
心序列、“填充”序列和选择性碱基组成，基因外
显子中的
GC
含量高则启动子与内含子中的
AT
含
量高，引物就是根据这个理论进行设计的。
基于
PCR
的分子标记技术
SRAP
，通过对引物
的独特设计来扩增
ORFs
，正反向引物的长度分别