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王爱香等
, 2011,
火鹤
胚状体诱导与发生过程中愈伤组织细胞学观察
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.97 pp.1700-1705 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0097))
1702
表
1
不同激素浓度配比对火鹤愈伤组织诱导的结果
Table 1 Effect of different doses of regulators on Anthurium
andraeanum callus induction
培养基编号
BA (mg/L) 2,4
-
D (mg/L)
愈伤诱导率
(%)
Medium
Percentage (%)
A1
0.5
0.2
37.5
A2
1.0
0.2
21.1
A3
0.5
0.4
33.3
A4
1.0
0.4
61.1
A5
0.5
0.6
68.8
A6
1.0
0.6
66.7
1.2
启动培养诱导的愈伤组织的细胞学观察
外植体诱导
2
个月的愈伤组织团为浅黄褐色略
带红色，表面比较光滑，紧实
(
图
1
-
4)
。石蜡切片观
察显示：其表皮层跟近表皮层有明显的界限
(
图
2
-
1)
，
表皮细胞大而不规则，近表皮层存在着较多的以薄
壁细胞为主体的愈伤组织结节
(
图
2
-
2)
，它们是由一
团排列紧密、体积比较小、细胞核比较明显的分生
性细胞组成，是将来不定芽芽原基分化的基础。在
愈伤组织中心，有一团细胞，体积比较小，核占细
胞的比例大，核和核仁颜色深，细胞质浓，生长方
向背离愈伤组织的中央，排列比较紧密，出现了芽
原基的分化
(
图
2
-
3)
。芽原基逐渐长大分化出叶原基
并突破表皮愈伤组织
(
图
2
-
4,
图
2
-
5)
，最终长成为不
定芽
(
图
2
-
6,
图
2
-
7)
。在切片观察时看到愈伤组织内
部有大量的错综复杂的管胞集团
(
图
2
-
8)
，以及零星
散布的草酸钙结晶
(
图
2
-
9)
。启动培养诱导的愈伤组
织中未观察到体细胞胚的发生。
1.3
继代培养获得的胚性愈伤组织的细胞学观察
将启动培养获得的愈伤组织切成小块，转入不
加
2,4
-
D
的培养基上进行继代培养。
20~30 d
后，愈
伤组织上长出不定芽，同时愈伤组织块周围长出浅
黄色或者黄绿色胚性愈伤组织。这些愈伤组织表面
不光滑、质地疏松
(
图
1
-
5)
，继续生长膨大。石蜡切
片观察显示，该愈伤组织许多细胞中含有较多的淀
粉粒。在一些含淀粉粒的细胞群中，有些细胞成长
为胚性细胞：细胞核大、细胞质浓厚、染色较深、
发生质壁分离
(
图
3
-
A)
。有的胚性细胞经过分裂形成
两个子细胞
(
图
3
-
B)
。有的胚性细胞不断进行分裂，
形成由数十个细胞组成的多细胞胚
(
图
3
-
C)
。多细胞
胚持续分裂与周围愈伤组织形成明显界限
(
图
3
-
D)
。
原胚细胞持续分裂向愈伤组织表层方向生长，其周
图
2
火鹤启动培养获得的愈伤组织细胞学观察
注
: 1:
愈伤组织表皮层与近表皮层的明显界线
×100; 2:
分
生组织结节
×100; 3:
芽原基
×100; 4:
连在一起的两个芽原
基
×100; 5:
芽原基分化出叶原基并逐渐突破愈伤组织表层
×100; 6:
芽原基突破表皮愈伤组织分化出叶片
×100; 7:
不
定芽
×100; 8:
管胞
×200; 9:
草酸钙结晶
(
箭头示
)×200
Figure 2 Cytological observation of the induced callus during
the Anthurium andraeanum initiation stage
Note: 1: Obvious borderline between surface and subsurface
layers of the callus×100; 2: Meristematic nodules×100; 3:
Shoot primordium×100; 4: One shoot primordium together
with another one×100; 5: Leaf primordia differentiated from
shoot primordium was gradually growing to the surface from
the inside of callus×100; 6: Leaves differentiated from leaf
primordia and broke through the surface of the callus×100; 7:
Adventitious shoot×100; 8: Racheid×200; 9: Calcium oxalate
crystal (marked by arrow)×200
围的薄壁细胞逐渐解体消失，最后突破愈伤组织表
层细胞
(
图
3
-
E)
，成为突出于愈伤组织表层的原胚
(
图
3
-
F)
。由内起源产生的原胚表面会附着有部分残
留的细胞碎片。有些内起源产生的原胚未能突破愈
伤组织表皮细胞就已经长成为心形胚，但这些多细
胞原胚都与周围组织细胞有明显界限，原胚周围的
薄壁细胞退化或解体
(
图
3
-
H,
图
3
-
I)
。火鹤体细胞
胚发生具有多样性，在某些视野中有时可同时观察
到几个发育程度不同的多细胞原胚
(
图
3
-
E,
图
3
-
F,