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孙晓宇等
, 2011,
不同保存
条件下五种大型海藻的
DNA
提取和
PCR
分析
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.95 pp.1680-1691 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0095)
1688
图
2
利用
SRAP
引物
ME1/EM3
对不同保存方法
DNA
的扩增
结果
注
: 1~4:
海带活体、硅胶干燥、冷冻干燥、低温储存
(
-
20
℃
)
样品
; 5~8:
龙须菜活体、冷冻干燥、低温储存
(
-
20
℃
,
-
80
℃
)
样品
; 9~12:
长心卡帕藻活体、硅胶干燥、恒温干燥、冷冻
干燥样品
; 13~16:
浒苔活体、硅胶干燥、恒温干燥、压标本
法干燥样品
; M: DNAMarker
Figure 2 SRAP results with different storing sample methods
(primer: ME1/EM3)
Note: 1~4: sample of
L. japonica
; 5~8: sample of
G.
Lemaneiformis
; 9~12: sample of
K. alvarezii
; 13~16: sample of
E. prolifera
; M: DNAMarker
图
3
利用
SRAP
引物
ME3/EM2
对不同保存方法
DNA
的扩增
结果
注
: 1~3:
海带活体、硅胶干燥、低温储存
(
-
80
℃
)
样品
; 4~7:
亨氏马尾藻活体、压标本法干燥、低温储存
(4
℃
,
-
20
℃
)
样
品
; 8~11:
长心卡帕藻活体、恒温干燥、冷冻干燥、低温储
存
(
-
80
℃
)
样品
; 12~15:
浒苔活体、硅胶干燥、压标本发干燥、
低温储存
(
-
80
℃
)
样品
; M: DNAMarker
Figure 3 SRAP results with different storing sample methods
(primer: ME3/EM2)
Note: 1~3: sample of
L. japonica
; 4~7: sample of
S.
henlowianum
; 8~11: sample of
K. alvarezii
; 12~15: sample of
E. prolifera
; M: DNAMarker
产物带型
(
高温干燥条件下保存的样品未检测得到
DNA,
因此无扩增条带
)
；
E2/M3
引物扩增结果表明，
除龙须菜、长心卡帕藻、浒苔在高温干燥
(45
℃
, 75
℃
)
条件下保存的样品以外，均获得与对照组相同的扩
增产物电泳图谱，同时也说明高温干燥
(45
℃
, 75
℃
)
条件下虽未能在琼脂糖凝胶上检测到
DNA
，溶液中
仍存在浓度较低的
DNA
，但由于其在扩增中的不稳
定性，此种样品制备方法不予以采用。而其他保存
方法下样品提取的
DNA
溶液得率相对较高，在
SRAP
中的扩增具有稳定性，可用于分子标记的研究。
1.4
不同保存方法提取
DNA
对
rbc
L
、
cox
Ⅰ基因扩增
结果的影响
利用
rbc
L
引物对不同保存条件下所提取的
DNA
进行扩增结果表明，以新鲜材料提取的
DNA
扩增产物的带型为对照，海带除在高温
(45
℃
)
干燥
条件下保存的样品未有扩增之外，其他样品扩增产
物的带型均与新鲜材料相同，此结果也说明高温
(75
℃
)
干燥所提取的
DNA
溶液中含有少量
DNA
；亨
氏马尾藻、龙须菜、长心卡帕藻在各种条件下保存
的样品扩增产物带型均与新鲜材料相同；浒苔除高
温
(75
℃
)
干燥样品没有获得扩增产物，其他几种样
品制备方法均获得与新鲜材料提取的
DNA
扩增产
物相同的带型
(
图
4)
。
图
4
不同保存样品的
DNA
的
rbc
L
扩增结果
注
: 1~4:
亨氏马尾藻活体、硅胶干燥、恒温干燥、压标本法
干燥样品
; 5~7:
龙须菜活体、冷冻干燥、低温储存
(
-
20
℃
)
样品
; 8~11:
长心卡帕藻活体、冷冻干燥、低温储存
(
-
20
℃
,
-
80
℃
)
样品
; 12~14:
浒苔活体、低温储存
(4
℃
,
-
20
℃
)
样品
;
M: DNAMarker
Figure 4
rbc
L results with different storing sample methods
Note: 1~4: sample of
S. henlowianum
; 5~7: sample of
G.
Lemaneiformis
; 8~11: sample of
K. alvarezii
; 12~14: sample of
E. prolifera
; M: DNAMarker
利用
cox
Ⅰ引物对不同保存条件下所提取的
DNA
进行扩增结果表明，所有条件下保存的样品均
有与对照样品相同的扩增
(
图
5)
。
综上两种基因扩增的结果显示，样品在高温干
燥保存条件下扩增结果不稳定，其他保存条件下样
品所提
DNA
，扩增结果稳定，可用于基因的扩增。
2
讨论
2.1
各种样品保存方法的评价
快速、经济地从大型海藻样品中提取高产量、
高纯度的基因组
DNA
已成为藻类分子生物学研究
的首要问题，其中藻类组织材料的采集与保存对提