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(付蓉蓉等, 2011, 番茄黄化
曲叶病的 Ty-1 和 Ty-3 抗性基因的 PCR 鉴定, 分子植物育种(online) Vol.9 No.91 pp.1647-1653 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0091))
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杂合Ty-1和纯合Ty- 3抗性基因的品种的抗性要明显
高于含杂合Ty-1 和杂合Ty-3 抗性基因的品种，说明
番茄黄化曲叶病的Ty- 3抗性基因的遗传可能为不完
全显性遗传。
经过育种学家多年的努力，在抗番茄黄化曲叶
病育种方面已经取得了显著成就。但是目前，大多
抗番茄黄化曲叶病的商业杂交种，基本都是导入了
单个抗性基因，当病害不是太严重时，表现为抗病；
但当病害大规模发生时，它们的抗性较低，接近感
病。而将多个抗性基因聚合到一个品种中，可以提
高番茄对番茄黄化曲叶病的抗性。并且随着番茄黄
化曲叶病的Ty-1 、Ty-2 、Ty-3 、Ty- 4及Ty- 5抗性基
因的定位及分子标记工作的进行(Zamir et al., 1994;
Hanson et al., 2006; Garcia1, et al., 2007, http://www.
plantpath.wisc.edu/, Geminivirus Resistant Tomatoes/
Markers/MAS-Protocols/Ty2-TGC-Garcia.pdf; Jensen,
et al., 2007, http://www.plantpath.wisc.edu/Geminivirus
ResistantTomatoes/Markers/MAS-Protocols/Ty3a-alle
le.pdf; Ji et al., 2007; Ji et al., 2009; Anbinder et al.,
2009)，育种学家可以利用相关的分子标记更加准确
快速地筛选抗原，并结合传统育种将其抗性基因聚
合到一个品种中，从而培育出具有更高、更广、更
持久抗性的番茄新品种。
因此，加强种质资源和抗病品种的引进，筛选
并创造新的育种材料，并聚合不同效应的抗病基
因，培育具有更广、更持久抗病性的番茄新品种成
为番茄黄化曲叶病抗病育种的主要方向。
3材料与方法
3.1材料
本实验所用的材料 1~10 为实验室从国外引种
的番茄黄化曲叶病抗病材料， 11~12 为感病栽培品
种材料，材料品种及来源见表2。
表 2 材料品种及来源
Table 2 Names and sources of materials
材料序号 品种名称 来源 材料序号 品种名称 来源
Materials number Materials names Materials sources Materials number Materials names Materials sources
1 佳美 法国 7 RT-Mannila 西班牙
Jiamei France Spain
2 福兰 西班牙 8 RT-019 西班牙
Fulan Spain Spain
3 RT-018 西班牙 9 RT-020 西班牙
Spain Spain
4 RT-037 西班牙 10 RT-022 西班牙
Spain Spain
5 RT-009 西班牙 11 鲜丰 中国
Spain Xianfeng China
6 RT-034 西班牙 12 交杂一号 中国
Spain Jiaoza 1 China
3.2引物合成
鉴定番茄黄化曲叶病 Ty-1 抗性基因所使用的
CAPS1标记引物参照Zamir等人的设计 (Zamir et al.,
1994)，鉴定Ty- 2抗性基因所使用的 SCAR2标记引
物参照Garcia等人的设计 (Garcia1 et al)，鉴定Ty -3
抗性基因所使用的SCAR3标记引物参照Katie等人
的设计(Jensen et al., 2007)。引物序列及其扩增产
物的长度见表3和表 4，所用引物由上海生物工程技
术公司合成。
3.3 PCR 扩增与检测
用CTAB法提取12份番茄样品的叶片总DNA，
作为 PCR的模板。用于 PCR 反应的试剂均购自上
海生物工程技术公司。 PCR 反应体系如下：模板
DNA 1 μL，正向引物1 μL (2 μmoL)，反向引物1 μL
(2 μmoL)，dNTP (10 mmol/L) 0.8 μL，10× Buffer
2 μL，Mg2+ 1.6 μL，Taq酶0.5 μL ，补充ddH2O至20 μL。
PCR反应程序如下：94℃变性5 min；然后94 ℃，30 s，
55℃，60 s ，72℃，1.5 min，共35个循环；最后 72℃