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孟衡玲等, 2011, 三种提取铁皮石斛叶片总 RNA 方法的比较, 分子植物育种 Vol.9 No.83 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0083)
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和 1 mL 无水乙醇，-20℃放置过夜；4 ℃，12000 r/min
离心 30 min ，弃上清液，用 75%乙醇和无水乙醇各
清洗沉淀 1 次，室温下干燥；沉淀溶于 30 µL DEPC
水中，-80℃ 冻存。
3.2.3 RNA 凝胶电泳检测
0.5 x TBE 作为电泳缓冲液，电压 120V ，琼脂
糖凝胶浓度为 1%，取 3 µL RNA 进行电泳检测。
3.2.4 RT-PCR 检测
采用铁皮石斛特异引物 F1： CGAGTCTCATA
CTGCCTTCACA；R1： ACCAGCCAAGGTCATC
AATCTC，铁皮石斛的 cDNA 为模板进行 PCR 反应，
其反应条件如下：94 5 min℃ ，35 个循环 (94 30 S℃ ，
53 30 S℃ ，72 1 min)℃ ，72 10 min℃ ，反应体系 25
µL (cDNA 1 µL, 引物 F1/R1 2 µL, 2×EasyTaq PCR
SuperMix 12.5 µL, ddH2O 7.5 µL)。
致谢
本研究由云南省产业重大关键技术开发专项项目(云发
改 高 技 [2007]1718 号 ) ， 国 家 支 撑 计 划 项 目
（2011BAI13B02-5）资助。
作者贡献
孟衡玲是本研究试验设计、实验研究及论文初稿写作的
执行人；杨生超，文国松，段承俐指导实验设计，数据分析，
论文写作与修改，査应洪是项目合作者，为本研究提供大量
的材料。
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