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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1565
-
1569
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1565
-
1569
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1565
研究报告
A Letter
落叶松总
DNA
的提取及
ISSR-PCR
引物筛选
李红艳
1
,
罗旭
1
,
王丙锋
2
,
王艳敏
1
孙海滨
1
1.
黑龙江省林业科学研究所
,
哈尔滨
, 150081
2.
黑龙江省农业科学院农药应用研究中心
,
哈尔滨
, 150086
通讯作者
: lihongyan426@yahoo.com.cn;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
77
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0077
收稿日期：
2011
年
05
月
10
日
接受日期：
2011
年
05
月
25
日
发表日期：
2011
年
06
月
17
日
这是一篇采用
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,
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件的使用与传播。
引用格式：
李红艳等
, 2011,
落叶松总
DNA
的提取及
ISSR-PCR
引物筛选
,
分子植物育种
Vol.9 No.77 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0077)
摘
要
以针叶树落叶松当年生新梢为试材，对落叶松总
DNA
提取方法和
ISSR-PCR
引物筛选进行了试验。改良
CTAB
法
可以在较短时间内提取到高纯度的
DNA
产物，用于
ISSR-PCR
扩增时其稳定性和重复性都很好。利用
50
个
ISSR
引物对来
自黑龙江省林口县青山林场的
10
个个体进行
PCR
扩增，筛选出了多态性丰富、条带清晰且重复性良好的
8
个引物。本研究
为落叶松种质资源的评估及遗传多样性分析奠定基础。
关键词
落叶松
; DNA
提取
; ISSR
分子标记
;
引物筛选
DNA Extraction and ISSR-PCR Primer Screening of Larch
Li Hongyan
1
, Luo Xu
1
, Wang Bingfeng
2
, Wang Yanmin
1
, Sun Haibin
1
1.Forestry Research Institute of Heilongjiang Province, harbin, 150081, P.R. China
2.Research Center of Pesticide Application, Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences, Harbin,150086, P.R. China
Corresponding author, lihongyan426@yahoo.com.cn;
Authors
Abstract
The methods of DNA extraction and primer screening of ISSR-PCR has been made using fresh leaves of the larch as
experiment materials. The improved CTAB method could obtain pure DNA in short time and more suitable for ISSR-PCR. Fifty
ISSR primers were used to screen the suitable primers with 10 samples of Larch in Qingshan Forest Farm of Heilongjiang Province
Linkou County, of which 8 ISSR primers with high resolution and multiple polymorphic bands were screened. The present study
could be used in the research for evaluation of germplasm resources and analysis of genetic diversity in Larch.
Keywords
Larch; DNA extraction; ISSR marker; primer screening
研究背景
落叶松为松科落叶松属的落叶乔木，是我国东
北、内蒙古林区以及华北、西南的高山针叶林的主
要森林组成树种，是东北地区主要三大针叶用材林
树种之一。
ISSR (Inter-simple Sequence Repeats,
内
部简单重复序列
)
分子标记技术是
1994
年
Zietkiewicz
等提出的，该技术具有模板
DNA
用量
少，实验操作简单、快速、高效，遗传多态性高，
重复性好等特点。已在多种动植物的种质鉴定
(
孙淑
霞等
, 2011; He et al., 2007)
、遗传多样性分析
(
李志
辉等
, 2009;
杨传平等
, 2005)
、遗传作图和基因定
位
(
马红勃等
, 2008;
连莲
, 2008)
研究方面得到广泛
应用。
高质量的总
DNA
及稳定的引物是获取可靠分
子标记结果的前提，虽然已有对落叶松进行分子标
记研究的若干报道
(
那冬晨等
, 2006;
张磊等
, 2008),
但关于详细研究落叶松
DNA
提取方法的报道较少。
因此，本文拟研究获得提取高质量落叶松总
DNA
的方法并筛选适合
ISSR-PCR
反应体系的引物，为
进一步用
ISSR
技术进行落叶松生产中的品种快速
鉴定和种质资源的保护利用奠定基础。
1
结果与分析
1.1
落叶松
DNA
的提取
改良
CTAB
法提取的落叶松基因组
DNA
主带
清晰，无明显拖尾，未降解，无
RNA
，点样孔也没