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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1539
-
1544
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1539
-
1544
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1539
技术主题
Technology Feature
美国白蜡
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
陈罡
,
叶景丰
,
马冬菁
,
王骞春
,
范俊岗
,
潘文利
辽宁省林业科学研究院
,
林木生物技术与分析测试中心
,
沈阳
, 110032
通讯作者
: chengang1625@163.com;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
74
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0074
收稿日期：
2011
年
03
月
10
日
接受日期：
2011
年
05
月
25
日
发表日期：
2011
年
06
月
15
日
这是一篇采用
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,
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引用格式：
陈罡等
, 2011,
美国白蜡
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
,
分子植物育种
Vol.9 No.74 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0074)
摘
要
本研究利用正交试验设计
L
16
(4
5
)
对美国白蜡
SRAP-PCR
反应体系的五个因素
(Mg
2+
, dNTP,
引物
,
Taq
DNA
聚合酶
和模板
DNA)
在四个水平上进行优化试验，结果表明，
Mg
2+
浓度对反应体系的影响最大；建立的美国白蜡
SRAP-PCR
最佳
体系
(25 μL)
为：
Mg
2+
2.5 mmol/L
、
Taq
DNA
聚合酶
0.5 U
、
dNTPs 0.25 mmol/L
、引物
0.4 μmol/L
、模板
DNA 40 ng/μL
。利
用优化后的反应体系对
4
个美国白蜡材料进行了种间多态性检测，结果表明，该体系能够很好的满足美国白蜡基因组
SRAP
扩增的要求。这一优化体系的建立为今后利用
SRAP
标记技术对美国白蜡进行分子遗传研究提供基础。
关键词
美国白蜡
; SRAP;
正交设计
;
体系优化
Optimization for SRAP-PCR System of
Fraxinus Americana
Based on
Orthogonal Design
Chen Gang , Ye Jingfeng , Ma Dongjing , Wang Qianchun , Fan Jungang , Pan Wenli
Liaoning Research Academy of Forestry Sciences, Forestry Biotechnology and Analysis Test Center, Shenyang, 110032, P.R. China
Corresponding author, chengang1625@163.com;
Authors
Abstract
The SRAP-PCR system of
Fraxinus Americana
was optimized by the orthogonal design which was in four levels of five
factors (Mg
2+
,
Taq
DNA polymerase, dNTPs, Primer, and DNA template). The result showed that the Mg
2+
concentration was the
most dominant factor affected on the result of PCR. The optimum SRAP-PCR system (25 μL volume) for
Fraxinus americana
included Mg
2+
2.5 mmol/L, dNTPs 0.25 mmol/L,
Taq
DNA polymerase 0.5 U, Primer 0.4 μmol·L
-1
, and DNA template 40 ng·μL
-1
.
Then applied this optimized reaction system to detect the polymorphism of 4
Fraxinus americana
materials, it was showed that this
system could meet the demands for SRAP amplification in
Fraxinus Americana
. This optimized system would provide a foundation
for molecular genetics research by using SRAP technique of
Fraxinus Americana
in the future.
Keywords
Fraxinus americana
; SRAP; orthogonal design; system optimization
研究背景
美国白蜡
(
Fraxinus americana
)
又名白梣，木犀
科落叶乔木，原产北美，抗逆性强，适生范围广，
是良好的水土保持经济树种。另外，其树型美观，
树冠茂密，绿叶期较长，也是城市绿化的优良树种。
目前应用分子标记技术在白蜡树种上的研究尚未
见报道，因此，开展新型分子标记技术研究对促进
白蜡育种进程具有重要的指导作用。
SRAP
标记是由美国加州大学
Li
和
Quiros
博士
(Li and Quiros, 2001)
开发的一种基于
PCR
扩增的分
子标记技术，其利用一对正反引物对开放阅读框
(ORFs)
扩增而产生多态性。与其他分子标记相比，
该标记具有简单快速、稳定性好、多态性高、不需
预知物种序列等优点，目前已在植物遗传多样性分
析、遗传图谱构建及种质鉴定等领域广泛应用。对
于
SRAP-PCR
扩增体系已在多种植物研究中建立，
但在美国白蜡中尚未见报道。本研究利用正交设
计，以美国白蜡为材料，建立了一套对其适宜的
SRAP-PCR
反应体系，旨在为进一步开展美国白蜡
种质资源遗传多样性研究奠定工作基础。
1
结果与分析