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施涯邻等
, 2011,
高质量木薯根
,
茎
,
叶总
RNA
和总蛋白样品的制备方法
,
分子植物育种
Vol.9 No.67 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0067)
1495
100 mmol/L Tris-Hcl pH 8.0, 10 mmol/L EDTA, 1%
SDS,
用
DEPC-H
2
O
配制并高温灭菌
)
和
6 mL
水饱和
酚于离心管中。
(2)
取
0.5 g
新鲜木薯组织，液氮充分
研磨成粉末后，迅速转移至准备好的离心管中，震荡
30 s
，再加入
6 mL
氯仿并震荡
30 s
，
4
℃，
12 000 r/min
离心
10 min
，取上清。
(3)
加入等体积氯仿，
4
℃，
12 000 r/min
离心
10 min
，取上清。
(4)
将上清转移到
新的离心管中，每管分装
200 µL
上清，加入等体积
的
4 mol/L LiCl
溶液，混匀后-
80
℃放置至少
1 h
。
(5)4
℃，
12 000 r/min
离心
20 min
，弃上清，加入
900
µL 75%
乙醇，
4
℃，
12 000 r/min
离心
5 min
，沉淀自
然干燥。
(6)
每管再加入
500 µL RNA
提取缓冲液，涡
旋振荡溶解沉淀后，再加入
600 µL 4mol/L LiCl
，混
匀后-
80
℃放置至少
1 h
。
(7)
重复步骤
(5)
，使用
75%
乙醇清洗沉淀
2
次，自然干燥后每管加入
20 µL
DEPC-H
2
O
溶解。冻存于-
80
℃。
3.4
木薯总蛋白提取
(1)
取木薯根、茎、叶各
1 g
，液氮充分研磨，转
移至离心管中，并加入
4 mL SDS
提取缓冲液
(6%
Tris, 5%
甘油
, 1% SDS, 2% DTT, 10 mmol/L
硫脲
,
2% PVPP, pH 7.5)
。
(2)
室温振荡
30 min
，
4
℃，
12 000
r/min
离心
30 min
，取上清。
(3)
加入
3
倍体积-
20
℃预
冷的
TCA
-丙酮溶液
(
含
10% TCA, 0.07% β
-
ME)
，
-
20
℃放置至少
2 h
。
(4)4
℃，
12 000 r/min
离心
30 min
，
弃上清，用-
20
℃预冷的丙酮
(
含
0.07% β
-
ME)
洗涤
沉淀
3
次。
(5)
蛋白质沉淀真空干燥后，加入适量蛋
白裂解液
(7 mol/L
尿素
, 2 mol/L
硫脲
, 4% CHAPS,
1% DTT)
，
4
℃溶解沉淀。
(6)4
℃，
12 000 r/min
离心
30 min
，取上清。
(7)2
-
D Clean-Up Kit
纯化，
Bradford
法测定蛋白浓度后，分装，-
80
℃保存。
作者贡献
施涯邻、王金子和王志强是本研究的实验设计和实验研
究的执行人，并完成数据分析，论文初稿的写作；蒙姣荣和
罗兴录参与实验设计，试验结果分析；陈保善是项目的构思
者及负责人，指导实验设计，数据分析，论文写作与修改。
全体作者都阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家自然科学基金课题
(
基于转录组学和蛋白
组学的木薯新种质创建的基础研究
, 30960203)
和广西科技
基础条件平台建设项目
(09
-
007
-
01, 10
-
046
-
02)
资助。特别
感谢广西大学国家重点实验室技术支撑组的工作人员对本
实验的支持。
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