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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1492
-
1496
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1492
-
1492
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1492
技术改进
Upgrade Technology
高质量木薯根、茎、叶总
RNA
和总蛋白样品的制备方法
施涯邻
1,2
,
王金子
1,2
,
王志强
1
,
蒙姣荣
1
,
罗兴录
3
,
陈保善
1,2
1.
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
,
南宁
, 530004
2.
广西大学生命科学与技术学院
,
南宁
, 530004
3.
广西大学农学院
,
南宁
, 530004
通讯作者
:
chenyaoj@gxu.edu.cn
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
67
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0067
收稿日期：
2011
年
05
月
10
日
接受日期：
2011
年
05
月
21
日
发表日期：
2011
年
05
月
31
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
件的使用与传播。
引用格式：
施涯邻等
, 2011,
高质量木薯根
,
茎
,
叶总
RNA
和总蛋白样品的制备方法
,
分子植物育种
Vol.9 No.67 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0067)
摘
要
木薯是一种重要的粮食作物和能源植物。为了研究木薯转录组和蛋白组，本研究以块根膨大期木薯品种华南
124
为材料，探索适合木薯块根、茎、叶的总
RNA
和总蛋白样品的制备方法。将高浓度氯化锂沉淀和酚氯仿抽提相结合，所获
得的高纯度总
RNA
能够满足构建木薯
cDNA
文库的要求；将
SDS
提取缓冲液和
TCA
-丙酮法相结合，能够提取得到适合双
向电泳的高纯度蛋白质样品。这些方法的建立，为进行大规模木薯转录组学和蛋白组学研究奠定了基础。
关键词
木薯
;
总
RNA;
总蛋白
; cDNA
文库
;
双向电泳
Methods of Preparation of High Quality Total RNA and Total Protein From
Cassava tissues of Root, Stem, and Leaves
Shi Yalin
1,2
, Wang Jinzi
1,2
, Wang Zhiqiang
1
, Meng Jiaorong
1
, Luo Xinglu
3
, Chen Baoshan
1,2
1. State Key Laboratory for Conversation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources, Nanning, 530004, P.R. China
2. College of Life Science and Technology, Guangxi University, Nanning, 530004, P.R. China
3. College of Agriculture, Guangxi University, Nanning,, 530004, P.R. China
Corresponding author, chenyaoj@gxu.edu.cn;
Authors
Abstract
Cassava (
Manihot esculenta
Crantz) is an important food crop and energy plant. For transcriptomics and proteomics
analyses of cassava, a study of methodology for preparation of high-quality total RNA and protein from tissues of root, stem, and leaf
of cassava variety Huanan 124 at the root bulking stage was carried out. Total RNA suitable for the construction of cDNA library was
obtained by a method that combines high concentrations of lithium chloride precipitation with phenol-chloroform extraction
protocols. High quality total protein suitable for two-dimensional electrophoresis could be extracted by the combination of SDS-lysis
buffer with TCA-acetone precipitation methods, the protein samples were suitable for. The establishment of these methods lays a
solid foundation for the future a large scale study of cassava transcriptomics and proteomics.
Keywords
Cassava; Total RNA; Total protein; cDNA library; Two-Dimensional Electrophoresis
研究背景
木薯
(
Manihot esculenta
Crantz)
是热带和亚热带
地区种植的一种重要植物，在我国南亚热带地区目
前的种植面积大约为
6.0
×
10
5
hm
2
~6.67
×
10
5
hm
2
。
木薯块根富含淀粉，是非洲、亚洲和南美地区发展
中国家的
7
亿多人的主要膳食能量来源之一
(Oates,
1997; Taylor et al., 2004)
。木薯块根不仅可供人类食
用，也是动物饲料和工业产品的重要原料来源。木
薯生产量受到一系列因素的制约，包括病虫害和收
获后块根的退化等生物因素和土壤酸度、养分不足
以及干旱胁迫等非生物因素的压力。通过对木薯进
行基因改造，已有报道获得高产量、高淀粉含量、
强抗逆性的木薯新种质
(Souza et al., 2003)
。
木薯叶片成分比较复杂，含有大量的多糖、酚
类和次级代谢产物，茎含有大量的纤维素，块根则
含有大量的淀粉多糖。这些都是提取植物总
RNA
和
蛋白质最难去除的干扰物质。使用传统的常规方
法，例如异硫氰酸胍法、
Trizol
法和
CTAB
法均难以
得到较高质量的植物
RNA (Logemann et al., 1987;
Newbury and Possingham, 1977; Su and Gibor, 1988)
。