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杨宁等
, 2011,
利用分子标记辅助选育白菜
Y02
甲型
“
两用系
”,
分子植物育种
Vol.9 No.51 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0051)
1386
1.4
新甲型
“
两用系
”
的配制
通过标记
syau-scr04
扩增选择可判断
BC
4
中
8’
号单株的基因型为
Ms
f
Ms
，其自交后代育性表现为
3:1
分离，在其自交后代群体中，选
7
株可育株与
不育株进行兄妹交，兄妹交后代
1:1
分离，可断定
基因型为
Ms
f
Ms
和
MsMs
，即新甲型
“
两用系
”
。遗
传模式如下：
MsMs
×
Ms
f
Ms
f
→
Ms
f
Ms
全可育
(All
fertile)
；
MsMs
×
Ms
f
Ms
→
Ms
f
Ms
，
MsMs
1:1 (
可育
fertile:
不育
sterile)
。
2
讨论
目前，分子标记辅助选择育种已在许多大田作
物中得到了应用
(Liang et al., 2004; Gao et al., 2008;
Sang et al., 2006)
。本试验将此方法应用于白菜类蔬
菜作物甲型
“
两用系
”
转育过程中以加速转育进程。
根据大白菜雄性不育系定向转育模式，基因型
为
Ms
f
Ms
f
的可育品系宜采用雄性不育系
(
Msms
)
作
为不育源进行转育
(
李承彧
, 2009)
。转育包含两部分
的连续回交工作，一部分是
Ms
f
Ms
×
Ms
f
Ms
f
，另一部
分是
Ms
f
ms
×
Ms
f
Ms
f
，回交后代育性都表现为全可
育。这两部分都需要通过测交鉴定基因型后再回
交。如果分别利用与
Ms
和
ms
连锁的分子标记鉴定
出含有
Ms
和
ms
的植株，可以省去测交环节，从而
减少工作量并加快转育进程。本研究利用标记
syau-scr04
辅助
Ms
基因的选择，研究开发与
ms
基
因紧密连锁的标记是今后亟待解决的一项任务。白
菜类蔬菜作物种植广泛，在核基因雄性不育系转育
过程中，利用分子标记技术在苗期对植株基因型进
行鉴定，可大大加速转育进程，减少工作量。
本试验利用标记
syau-scr04
辅助目的基因
Ms
的选择，最终育成了分离比例为
1:1
的花心白菜
‘
宫
古花蕊
’Y02
甲型
“
两用系
”
。
3
试验材料与方法
3.1
亲本及不育源材料
不育源材料：白菜核不育系
06SX110(
Msms
)
，
“
两用系
”
的不育株
06SX090(
MsMs
)
。
转 育 目 标 品 系 ： 花 心 白 菜
‘
宫 古 花
蕊
’Y02(
Ms
f
Ms
f
)
。
3.2
用于辅助选择的标记
试验选择冯辉等
(2009)
开发的与不育基因
Ms
紧密连锁的
SCAR
共显性标记
syau-scr04
，引物
序 列：
5′
-
AGGATATATCTTGGCTCACGAG
-
3′
，
3′
-
CATCAATAGTGGCGTATGTCTG
-
5′
，该标记距
离
Ms
基因的遗传距离为
2.5 cM
，退火温度为
58
℃
。
3.3 DNA
提取及
PCR
分析
DNA
提取采用的是改良
CTAB
法
(Williamson
et al., 1994)
。
PCR
分析方法，
10 μL
体系：包括
6.6 μL
灭菌水，
PCR
缓冲液
(Mg
2+
)1 μL
，
2.5 mmol/L dNTPs
0.8 μmol
，
2.5U/μL
Taq
聚合酶
0.1 μL
，
0.5 μmol/L
引物
1 μL
，
2 ng/μL DNA 0.5 μL
。
PCR
扩增程序为：
预变性
5 min (94 )
℃
，变性
1 min (94 )
℃
，退火
1 min
(58 )
℃
，延伸
2 min (72 )
℃
，循环
30
次，
72
℃
延伸
保持
5 min
。
3.4
辅助选择转育路线
根据
“
核不育复等位基因遗传假说
”(
冯辉等
,
1995; Feng et al., 1998)
，基因型为
Ms
f
Ms
f
的待转育
品系应以核不育系
(
Msms
)
为不育源，设计甲型
“
两
用系
”
定向转育遗传模式
(
图
4)
。通过与轮回亲本连
续
4
代回交，实现基因型及植物学性状的同时转育，
图
4
分子标记辅助选择转育白菜甲型
“
两用系
”
遗传模式
Figure 4 Genetic model for directional transfer of the multiple
Allele inherited AB line type
Ⅰ
in Chinese Cabbage based on
MAS