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曾建斌等, 2011, 烟草优质品种花全长 cDNA 文库的构建和质量鉴定, 分子植物育种 Vol.9 No.40 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0040)
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续表 1
Continuing Table 1
序列名称
Seq. Name
相似性
Similarity
注释数量
Total number
of annotation
功能注释
Functional annotation
TF19 77.9% 9 C: 依赖质子转运的 ATP 合酶复合体催化亚基 F1; P: 脂质代谢过程 ; P: 质膜质子转运
和 ATP 合成相偶联过程; C: 线粒体内膜 ; F: 氢离子转运偶联 ATP 合酶活性; F: ATP
结合; P: 胚胎发育 ; C: 质膜; F: 质膜质子转运和 ATP 转换活性
C: F1 Proton-transporting ATP synthase complex, catalytic core F(1); P: Lipid metabolic
process; P: Plasma membrane ATP synthesis coupling with proton transport; C:
Mitochondrial inner membrane; F: Hydrogen ion transport coupling with ATP synthase
activity; F: ATP binding; P: Embryonic development; C: Plasma membrane F: Plasma
membrane H+-ATP activity
TF20 69.5% 7 P: 细菌防疫 ; C: 液泡 ; P: 干旱胁迫应答; F: 半胱氨酸内肽酶活性; P: 蛋白质水解; C:
核仁; P: 盐胁迫应答
P: Defense response to bacterium; C: Vacuole; P: Response to desiccation; F:
Cysteine-type endopeptidase activity; P: Proteolysis; C: 核仁 Nucleus; P: Response to salt
stress
TF21 61.2% 2 C: 细胞膜 ; P: 转运过程
C: Membrane; P: Transport
注: F: 分子功能 ; C: 细胞组件; P: 生物过程
Note: F: Molecular function; C: Cellular component; P: Biological process
解、光合作用、脂肪酸代谢、核酸代谢等重要的生
物过程，既有物质代谢过程，又伴随能量代谢过程。
通过这些有限的基因功能注释结果可以预测，文库
中信息量较为丰富，获得候选基因是可行的。
2讨论
SMART法由Clontech公司创建，具有简单、快
速等优点，目前被许多学者广泛运用于文库的构
建。常规的SMART法步骤中，双链 cDNA经过蛋白
酶K消化和SfiI酶切后，较常用的是 cDNA分级分离
法收集片段，用于连接。往往构建的文库插入片段
大都集中在1 000 bp 左右，大片段占的比例很小。
由于不同长度的cDNA片段在连接反应中的连接速
度不同，短片段优先连接，长片段连接效率则低，
导致了长片段cDNA克隆较少。本研究将琼脂糖凝
胶电泳切胶回收的方法引入，取代cDNA分级分离
法，构建的文库经鉴定大片段的比例明显提高。
cDNA文库的质量具体反映在两个方面( 朱碧
云, 2009)：一是文库的代表性，可用一个量化的指
标来衡量，即文库的库容量。本研究所构建的原始
cDNA文库具有的库容为 4.05×106 个独立重组子，
为满足筛到低丰度mRNA的要求，一般cDNA文库
构建要求其库容不小于1×106 cfu/mL，本研究构建
的cDNA文库完全达到了这个库容要求。二是重组
cDNA片段的大小。本研究所构建的文库插入片段集
中在1 000 bp~2 500 bp之间，平均长度约为1 400 bp，
保证了高比例全长cDNA的获得。综合两方面判断，
文库质量较高，可用于基因的克隆和筛选，从而为
进一步揭示烟草花发育分子机制和烟草遗传改良
提供有效途径。
3材料与方法
3.1实验材料
3.1.1烟草材料
以福建烤烟品种翠碧一号为材料，等到现蕾和
开花阶段，取下花蕾和花序迅速置于液氮中冷冻，
-80℃冰箱保存备用。
3.1.2实验试剂
采用Biospin胶回收试剂盒和质粒小量提取试
剂盒，PrimerScript逆转录酶，RNase Inhibitor，SfiI，
Ex-Taq，dNTP (10 mmol/L与2.5 mmol/L)、DL2000
和 DL15000 分子标准等均购自大连宝生物公司
(TAKARA)，连接酶购于NEB公司，大肠杆菌DH5α
菌种由本实验室保存，其它试剂为国药集团化学试
剂有限公司生产。
3.1.3引物
见表2。