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曾建斌等
, 2011,
烟草优质品种花全长
cDNA
文库的构建和质量鉴定
,
分子植物育种
Vol.9 No.40 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0040)
1307
图
3
随机挑取
20
个菌落的
PCR
检测
注
: M: DL15000
分子量标准
; 1~20:
菌落
Figure 3 PCR detection of randomly selected 20 colonies
Note: M: DL15000 marker; 1~20: Colonies
再次从板上随机调取
30
个克隆，摇菌，提质粒
后，用限制性内切酶
Sfi
I
酶切后，经
1%
的琼脂糖凝
胶电泳检测
(
见图
4)
。如图
4
所示，插入片段大小与
菌液
PCR
结果基本吻合，进一步验证了文库的质量。
1.4
测序结果初步分析
测序获得有效序列为
22
条，按
Blast2GO
默认的
参数运行完后，根据序列相似性分布自动输出物种
相似性分布统计图如
(
图
5)
，最高的为水稻和葡萄，
紧接为拟南芥、毛果杨，烟草排在第五位。由于前
四种植物基因组都相继破译，所拥有的基因资源丰
富，而烟草基因组庞大而复杂，这就为其基因组的
破译带来困难。因此，构建
cDNA
文库，从转录组
研究烟草基因是十分必要的。
图
4
随机挑取
30
个菌落
Sfi
I
酶切
注
: M: DL15000
分子量标准
; 1~30:
菌落
Figure 4
Sfi
I digestion of randomly selected 30 colonies
Note: M: DL15000 marker; 1~30: Colonies
分别从分子功能、细胞组件、生物过程类别对
序列进行
GOs
功能注释，
22
条序列中具有注释的序
列为
18
条
(
表
1)
，剩余
4
条为未知功能或无功能的基
因序列。在这些注释的功能中，参与了不同的细胞
器组件，涉及到生物体内不同的代谢过程，如糖酵
图
5
物种相似性分布
注
:
横轴
: BLAST
比对分值
;
纵轴
:
物种
Figure 5 Catelog of species distribution
Note: Horizontal: BLAST hits score; Vertical: Species