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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1305
-
1311
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1305
-
1311
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1305
研究报告
A Letter
烟草优质品种花全长
cDNA
文库的构建和质量鉴定
曾建斌
1
,
陈华
1
,
陈顺辉
2
,
张冲
1
,
蔡铁城
1
,
庄伟建
1
1.
福建农林大学福建省作物分子与细胞生物学重点实验室
,
福州
, 350002
2.
福建省烟草专卖局烟草农业科学研究所
,
福州
, 350003
通讯作者
:
weijianz1@163.com;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
40
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0040
收稿日期：
2010
年
11
月
18
日
接受日期：
2011
年
02
月
28
日
发表日期：
2011
年
04
月
08
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
件的使用与传播。
引用格式：
曾建斌等
, 2011,
烟草优质品种花全长
cDNA
文库的构建和质量鉴定
,
分子植物育种
Vol.9 No.40 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0040)
摘
要
以优质烤烟品种翠碧一号花为材料，
CTAB
法提取总
RNA
，按经修改的
Creator
TM
SMART
TM
cDNA Library
Construction kit
的方法，成功构建了花全长
cDNA
文库。经鉴定，初级文库库容为
4.05
×
10
6
个克隆，重组率达到
95%
，插
入片段集中在
1 000 bp~2 500 bp
之间，平均长度约为
1 400 bp
，经扩增后的文库滴度为
6.75
×
10
9
pfu/mL
。随机挑取
24
个克
隆进行测序，获得有效序列
22
条，利用
Blast2GO
软件进行初步分析，其中
18
条序列具有不同数量的功能注释。综合表明，
所构建的文库质量高，可用于筛选花发育重要功能基因，这为揭示烟草花发育机理和烟草遗传改良提供了物质基础。
关键词
烟草
;
花
; SMART
技术
; cDNA
文库
Construction of a Full-length cDNA Library from the Flower of a Quality
Tobacco Germplasm and Quality Characterization
Zeng Jianbin
1
, Chen Hua
1
, Chen Shunhui
2
, Zhang Chong
1
, Cai Tiecheng
1
, Zhuang Weijian
1
1. Fujian Key Lab of Crop Molecular and Cell Biology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, 350002, P.R. China
2. Institute of Fujian Tobacco Agriculture and Science Research, Fujian Bureau of Tobacco Monopoly, Fuzhou, 350003, P.R. China
Corresponding author, weijianz1@163.com;
Authors
Abstract
A exellent library was successfully constructed from flower of a high quality flue-cured tobacco variety CuiBi1 by a
modified method of Creator
TM
SMART
TM
cDNA library construction kit. Evaluation assays were performed on the library and the
results was showed as follows. The primary library storage capacity was 4.05×10
6
, the recombinant rate was 95%, the insert
fragments concentrated in 1 000 bp to 2 500 bp, with an average length of 1 400 bp, and the amplify library titer was 6.52×10
9
pfu/mL. Twenty-four clones were randomly selected for sequencing, twenty-two valid sequences were obtained, and then using
Blast2GO software for preliminary analysis, eighteen sequences of which had different numbers of functional annotion. It was
indicated that the library was of high quality, which would not only be helpful for screening important genes of flower devel opment,
but also providing the materal basis for revealing the mechanism of tobacco flower development and genetic improvement.
Keywords
Nicotiana tabacum
; Flower; SMART technology; cDNA library
研究背景
花器官是植物生殖过程中重要的功能器官，它
的变异或败育对植物繁衍、种群扩散和农业生产将
带来不利影响
(
华志明
, 1998)
。了解植物开花行为是
农学和园艺生产上极具经济意义的课题。长期以
来，对花的研究多限于形态描述以及开花生理方
面，随着分子生物学技术突飞猛进的发展，从分子
水平揭示花发育机理已经是植物分子生物学的活
跃研究内容。
通过对双子叶模式植物拟南芥和金鱼草花器
官突变体的研究，初步揭示了花器官发育的遗传控
制机理，并建立了花器官发育
ABC
模型
(
崔荣峰和梦
征
, 2007)
。该模型认为决定被子植物花各个器官发
育的基因共分为
A
、
B
、
C
三类。随着研究的深入，
克隆出的花同源异型基因数量不断增加，进而又发
现了
D
、
E
两类基因。这样经典的
ABC
模型就发展成
为
ABCDE
模型
(
丛楠等
, 2007)
。这些花器官发育相
关的同源异型基因，大都属于
MADS-box
基因家族，
该家族成员作为一类转录调控因子在植物花发育
调控中发挥着重要作用，到目前为止，已相继克隆