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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1240
-
1244
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1240
-
1244
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1240
技术主题
Technology Feature
基于棉花
SSR
的多色荧光标记检测技术
匡猛
,
杨伟华
,
许红霞
,
王延琴
,
周大云
,
冯新爱
,
张玉翠
,
苏畅
中国农业科学院棉花研究所
,
农业部棉花遗传改良重点开放实验室
,
安阳
, 455000
通讯作者
:
yangwh@cricaas.com.cn
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
31
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0031
收稿日期：
2010
年
12
月
10
日
接受日期：
2011
年
03
月
10
日
发表日期：
2011
年
03
月
21
日
这是一篇采用
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
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引用格式：
匡猛等
, 2011,
基于棉花
SSR
的多色荧光标记检测技术
,
分子植物育种
Vol.9 No.31 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0031)
摘
要
基于棉花
SSR
多色荧光标记技术拟构建我国棉花主栽品种
DNA
指纹数据库。分析了试验中出现的三种主要特异峰
峰型：尖锐单峰、连续多峰与
N+1
峰，对棉花杂交种杂合峰的三种表现形式与荧光多重
PCR
组合建立的基本原则进行了总
结。比较了多色荧光标记检测技术与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测技术，分析了各自的优缺点，探讨了两种检测技术结
合使用的方式。
关键词
棉花
; SSR;
荧光检测
;
多重
PCR
Multiplex Fluorescence Detection Technology Base on Cotton SSR Marker
Kuang Meng , Yang Weihua , Xu Hongxia , Wang Yanqin , Zhou Dayun , Feng Xinai , Zhang Yucui ,
Su Chang
Cotton Research Institute, Chinese Academy of Agriculture Sciences, Key Laboratory of Cotton Genetic Improvement, Ministry of Agriculture, Anyang,
455000, P.R. China
Corresponding author, yangwh@cricaas.com.cn;
Authors
Abstract
DNA fingerprinting database of cotton major cultivars in China was to be constructed based on SSR marker technology
with fluorescent-labeled. Three main types of special peak were analyzed, including sharp peak, consecutive multi-peak and N+1
peak. Three heterozygous peak types of hybrid and the fundamental principle for establishing fluorescent multiplex PCR sets were
summarized. Two detection technologies were compared between fluorescent system and conventional silver staining system, the
virtues and defects were analyzed. The combinative way of the two detection technologies was discussed.
Keywords
Cotton; SSR; Fluorescence detection; Multiplex PCR
研究背景
与其他分子标记相比，以微卫星序列为基础的
SSR (Simple Sequence Repeat)
标记在
DNA
指纹鉴定
上显示了独特的优越性：
SSR
标记数量丰富，覆盖
整个基因组，揭示的多态性高，以孟德尔方式遗传，
呈共显性
(
匡猛等
, 2009)
。已在品种鉴定、基因组作
图及遗传多样性研究等领域得到了广泛的应用
(Chen et al., 1997; Rödera et al., 1998; Struss and
Plieske, 1998)
。但基于常规聚丙烯酰胺凝胶电泳与
银染技术的检测方法在分析的材料和位点较多时，
不同胶板间数据的整合与统是一项很繁琐的工作，
数据结果的准确性也很难保证。笔者在构建我国棉
花主栽品种
DNA
指纹数据库的研究工作中，采用了
多色荧光标记检测技术，以四种不同颜色的荧光染
料标记在棉花
SSR
引物的
5′
端，荧光检测器对标记
有荧光染料的扩增产物进行信号采集，并通过与各
泳道的分子量内标进行比对，可自动读取产物片段
大小，大大提高检测效率的同时保证了数据的准确
性。王凤格等构建了基于毛细管五色荧光检测系统
的高通量多重
PCR
复合扩增体系用于玉米
DNA
指
纹库的构建研究中，并建立了相应的指纹库标准化
规范
(Wang et al., 2007;
王凤格等
, 2007)
。郝晨阳等
采用荧光标记技术构建了我国普通小麦核心种质
指纹库
(Hao et al., 2008)
。然而，基于棉花
SSR
的多
色荧光标记检测技术构建我国棉花品种
DNA
指纹
数据库的研究还未见相关报道。