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周坤华等
, 2011,
辣椒属栽培种、野生种和种间杂交后代的
SRAP
分析
,
分子植物育种
Vol.9 No.29 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0029)
1213
种质与
C
.
annuum
遗传相似系数
(0.750)
，表明海
南野生灌木辣椒与
C
.
annuum
亲缘关系要稍远于
美洲灌木辣椒与
C
.
annuum
亲缘关系。我国海南
地区气候条件和生态环境与中南美洲类似，可能
是因为地理隔离或起源地的不同，才导致海南野
生灌木辣椒与美洲灌木辣椒有较大的
SRAP
扩增
位点差异。
种间杂交是实现基因转移的重要途径，本研究
对辣椒种间杂交材料进行了
SRAP
分析，结果显示，
随着自交世代的增加，种间杂交材料与其母系亲本
(
C
.
annuum
)
遗传相似系数越来越大，至
F
4
代，遗传
相似系数已达
0.943~0.956
，达到
C
.
annuum
种内亲
缘关系水平。而与父系亲本
(
C
.
chinense
)
相似系数则
无显著变化，仍处于较低水平。这可能是因为人工
选择多倾向于选择综合性状优良的单株进行自交
留种，而
C
.
annuum
已长期人工驯化栽培，相比于
其他栽培种或野生种，
C
.
annuum
具有更广的适应
性和更佳的商品性，因此，人工选择结果使种间杂
交后代迅速向
C
.
annuum
遗传背景转化。已有研究
表明，
C
.
chinense
和
C. frutescens
具有抗多种病害
的有利性状
(Monma and Sakata, 1997; Bosland, 2000;
Souza and Cafe Filho, 2003; Khaderk et al., 2007)
，因
此，通过种间杂交途径可以将
C
.
chinense
或
C.
frutescens
抗病基因转移至
C
.
annuum
中，从而拓展
C
.
annuum
遗传基础，创新辣椒种质。
3
材料与方法
3.1
供试材料
选取有代表性的辣椒材料共
41
份
(
表
3)
，其中
C. annuum
材料
29
份，分属于长椒、圆锥椒、灯
笼椒、簇生椒和樱桃椒等
5
个变种；
C
.
frutescens
种质
3
份，含中国海南野生种质
2
份，美国种质
1
份；
C
.
chinense
和
C
.
baccatum
各
1
份；种间杂种
C
.
annuum
×
C
.
frutescens
(F
1
)1
份，种间杂交后代
C
.
annuum
×
C
.
chinense
(F
2
~F
4
)6
份。
2009
年
3
月
16
日播种育苗，
4
月
25
日定植，
每个材料定植
20
株。
SRAP
试验于
2009
年
6~11
月
在江西省农科院油料作物重点实验室进行。
3.2 DNA
提取
在辣椒生长盛期采摘植株嫩叶，采用改良
CTAB
法
(Murry and Thompon, 1980)
提取基因组
DNA
。用
UV-1240
型紫外分光光度计检测
DNA
溶
液浓度与纯度，并将其稀释为
50ng/μl
，-
20
℃保存
备用。
3.3
引物组合筛选与反应体系
以材料
B
9431
和
H108
基因组
DNA
为模板，筛
选
SRAP
引物组合。从
198
对引物组合中筛选出多
态性好、扩增条带稳定的引物组合
20
对进行本试
验分析。
PCR
反应体系参照本试验室优化的
10 μL
体系进行
(
周坤华等
, 2010)
，其中
Taq
酶
0.75U
、
Mg
2+
0.6 mmol/L
、
dNTPs 0.2 mmol/L
、引物
0.8μmol/L
、
模板
DNA 50 ng
。
PCR
反应在
Eppendorf
公司的
PCR
仪中进行，扩增程序为：
94
℃
5 min
；
94
℃
1 min
，
35
℃
1min
，
72
℃
1 min
，
5
个循环；
94
℃
1 min
，
50
℃
1 min
，
72
℃
1 min
，
35
个循环；
72
℃
10 min
，
4
℃
保存。
PCR
产物采用
6%
变性聚丙烯酰胺凝胶
(7mol/L)
尿素电泳，电泳缓冲液为
1×TBE
，
70w
恒功率电泳
1.5
小时。银染法
(
许绍斌等
, 2002)
染色显影，在荧
光灯上观察分析条带。
3.4
数据统计分析
将电泳图谱上清晰的条带记为
“1”
，同一位置没
有条带记为
“0”
，
获得数据矩阵。用
Ntsys2.0
软件
计算遗传相似系数并进行聚类分析，遗传相似系数
(genetic similarity, GS)
以
Jaccard
系数表示，
UPGMA
方法聚类，得到亲缘关系树状图。