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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1203
-
1208
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1203
-
1208
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1203
技术主题
Technology Feature
鹅掌楸属植物高质量基因组
DNA
提取方法研究
王鹏凯
,
陈金慧
,
肖娇
,
施季森
南京林业大学
,
国家林业局和江苏省林木遗传与基因工程重点实验室
,
南京
, 210037
通讯作者
:
jshi@njfu.edu.cn
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
28
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0028
收稿日期：
2010
年
12
月
05
日
接受日期：
2011
年
02
月
28
日
发表日期：
2011
年
03
月
10
日
这是一篇采用
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,
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引用格式：
王鹏凯等
, 2011,
鹅掌楸属植物高质量基因组
DNA
提取方法研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.28 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0028)
摘
要
以鹅掌楸、北美鹅掌楸、杂种鹅掌楸的萌动幼芽和幼叶为材料，利用
CTAB
法、
PEG
法、
DNeasy Plant Mini Kit
(QIAGEN)
、新型快速植物基因组
DNA
提取试剂盒
(BioTeke)
提取基因组
DNA
。同时使用
PEG
法中的
PEG
漂洗液配合另外
三种方法提取。综合比较七种
DNA
提取方法表明：
PEG
法中的
PEG
漂洗液可以有效去除材料中的次生代谢物提高
RnaseA
效率，增加
DNA
纯度。配合
DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN)
使用可获得高质量高浓度
DNA
。检测结果显示
OD
260
/OD
280
介于
1.84~1.86
之间，
OD
260
/OD
230
介于
2.3~2.4
之间，
DNA
得率为
180~200 µg/g
，琼脂糖凝胶电泳结果显示
DNA
完整性良好。
关键词
鹅掌楸属植物
;
萌动芽
;
叶片
;
高质量
DNA
提取
Study on Extraction Methods of High Quality Genome DNA of Liriodendron
Wang Pengkai , Chen Jinhui , Xiao Jiao , Shi Jisen
Nanjing Forestry University, The Key Laboratory of Forestry Genetics and Gene Engineering of the State Forestry Administration and Jiangsu Province,
Nanjing, 210037, P.R. China
Corresponding author, jshi@njfu.edu.cn;
Authors
Abstract
Genome DNA was extracted from the sprouting buds and leaves of Liriodendron chinense, L. tulipifera and their hybrids
(
L. Chinense
×
L. tulipifera
).The methods were CTAB, PEG, DNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN), New Plant DNA Extraction Kit
(BioTeke) and PEG washing buffer with CTAB, QIAGEN kit and BioTeke kit. The performances of seven extraction methods of
genome DNA were compared in this report. The results showed the PEG washing buffer can increase the purity of DNA extraction
through removing foreign material and enhancing RnaseA effect. The OD
260
/OD
280
of DNA solution ranged between 1.84-1.86 and
OD
260
/OD
230
ranged between 2.3~2.4. The productivity was between 180~200 µg/g. The extracted DNA was complete by the result
of agarose gel electrophoresis.
Keywords
Liriodendron; Sprouting bud; Leaf; Extraction of high quality DNA
研究背景
木兰科鹅掌楸属
(
Liriodendron
)
植物现存两个
种，即鹅掌楸
(
Liriodendron chinense
)
和北美鹅掌楸
(
L. tulipifera
)
。
1963
年叶培忠先生成功培育出了鹅
掌楸和北美鹅掌楸的种间杂交种
(
南京林产工业学
院林学系育种组
, 1973)
。杂交鹅掌楸杂种优势明显，
具有生长快、树形美、抗性强等特点，在园林观赏、
道路绿化和用材造林方面有很高的利用价值
(
李周
岐等
, 2001)
。随着对鹅掌楸属植物的关注度不断增
加，引种试验、生理生态学特性、杂种优势遗传学
等基础研究也在不断跟进。以杂交鹅掌楸体细胞胚
胎发生技术为代表的细胞培养方面研究也不断成
熟，逐步形成一个完整的技术平台。在此平台的基
础上发展的转基因、分子生物学等研究也不断发展
(
陈金慧等
, 2003;
陈志等
, 2007;
吴淳等
, 2010)
。这
些研究要求使用的
Southern
、
AFLP
、
RFLP
等技术
对基因组
DNA
的质量、纯度要求较高。而鹅掌楸属
植物叶片本身具有油细胞，次生代谢物含量也极为
丰富
(
蔡霞等
, 2000;
陈茜文
, 1995)
，使
DNA
的大量
提取具有一定的难度。传统鹅掌楸属植物分子遗传
学中所使用的
DNA
一般采用
CTAB
-硅珠法提取，该
提取方法虽然可以达到
DNA
纯度要求，但得率非常
低，且常常会有硅珠残留
(Doyle et al, 1990; Rogstad,
2003;
胥猛等
, 2008)
。残留的硅珠会抑制多种酶的