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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1189
-
1196
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1189
-
1196
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1189
研究报告
A Letter
落叶松体细胞胚胎全长
cDNA
文库构建及初步分析
栗婷
1
,
朱彩虹
2
,
齐力旺
2
,
韩素英
1
1.
中国林科院森林生态环境与保护研究所
,
北京
, 100091
2.
中国林科院林业研究所细胞生物学实验室
,
北京
, 1000911
通讯作者
:
syhanqi@yahoo.com.cn;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
26
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0026
收稿日期：
2011
年
01
月
18
日
接受日期：
2011
年
02
月
28
日
发表日期：
2011
年
03
月
07
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
件的使用与传播。
引用格式：
栗婷等
, 2011,
落叶松体细胞胚胎全长
cDNA
文库构建及初步分析
,
分子植物育种
Vol.9 No.26 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0026)
摘
要
以日本落叶松胚性细胞系
638
＃
体细胞胚胎发育多个时期的胚性组织为材料，利用
SMART
技术构建了落叶松体细胞
胚胎全长
cDNA
文库。经检测，所构建初始文库滴度为
2.25×10
6
pfu/mL
，重组率为
95.13%
，扩增文库滴度为
2.65×10
9
pfu/ mL
，
插入片段长度主要分布在
0.5~2 kb
之间，平均长度为
850 bp
；所构建文库能够用于目的基因分离筛选及表达。从初始文库中
随机挑选
16
个克隆进行测序，成功测序
15
个，经去除低质量序列并拼接，获得
13
个
unigenes
，包括
2
个
contigs
和
11
个
singletons
，
其中
3
个为已知功能
unigenes
，
2
个
unigenes
具有推测功能，
2
个
unigenes
功能未知，另外
6
个
unigenes
在蛋白质数据库中无同
源序列，所构建的文库为从分子水平上揭示落叶松体细胞胚胎发育机理，进一步发现与诠释关键基因功能及其表达奠定
物质基础。
关键词
落叶松
;
体细胞胚胎
;
全长
cDNA
文库
; SMART
Construction and Primary Analysis of a Full-length cDNA Library for
Larix
Somatic Embryo
Li Ting
1
, Zhu Caihong
2
, Qi Liwang
2
, Han Suying
1
1 Institute of Forest Ecology,Environment and Protection
，
Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, P.R. China
2. Laboratory of Cell Biology,Research Institute of Forestry,Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, P.R. China
Corresponding author, syhanqi@yahoo.com.cn;
Authors
Abstract
Using the embryogenic callus at different stage of somatic embryo development of cell line 638
#
of
larix leptolepis
, The
full length cDNA library of
Larix leptolepis
somatic embryo was constructed through SMART method.After identification, The titers
of the primary library and amplified library were 2.25×10
6
pfu/mL and 2.65×10
9
pfu/mL,respectively.The recombination rate was
95.13%. The lengths of most cDNAs in the library ranged from 0.5kb to 2kb, and the average size of insert fragment is about
850bp.These results indicate that the library is qualified for cloning and expressing target genes.A total of 16 clones randomly chosen
from the cDNA library were sequenced and these expressed sequences tags(ESTs) were analyzed. A set of 15 sequences were
obtained.Clustering and assembly of these cDNA sequences resulted in 13 unigenes,including 2 contigs and 11 singletons.Among
them, 3 unigenes were predicted to have known functions, 2 unigenes have putative function, 2 unigenes are unnamed or have
unknown function and 6 unigenes which have not high similarity sequences in the GenBank protein databa se have unknown
function. The cDNA library we constructed is a good source for cloning cDNA of rare mRNA and identifying functional genes from
Larch somatic embryo.
Keywords
Larix
; Somatic embryo; Full length cDNA library; SMART
研究背景
植物体细胞胚胎发生体系作为细胞全能性表
达的重要途径，在人工种子、种质保存、无性繁殖、
遗传转化等诸多领域具有重要应用价值
(
张蕾等
,
2009;
吕守芳等
, 2003)
，也为胚胎发育过程中各种
生物学事件研究提供理想的模式体系。迄今，已有