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陈丽静等
, 2011,
百合
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
,
分子植物育种
Vol.9 No.24 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0024)
1177
3.4 PCR
反应体系优化的二因素交叉试验设计
3.4.1
模板浓度对
PCR
结果的影响
不同模板
DNA
浓度对
SRAP
扩增体系有明
显影响，模板浓度梯度设置如表
1(
进行两次重复
)
所示。
3.4.2
引物浓度梯度试验
最佳引物浓度十分重要，在确定模板浓度之
后，引物浓度其浓度梯度设置如表
2(
进行两次重复
)
所示。为了保证电泳和检测的的效果，采用的是变
性聚丙烯酰胺凝胶电泳并用银染法进行检测。
SRAP
所用引物序列如表
3
所示。
表
1
模板浓度梯度
Table 1 The concentrations gradient of template
序号
NO.
模板浓度
(ng/15 μL)
Template concentrations (ng/15μL)
序号
NO.
模板浓度
(ng/15μL)
Template concentrations (ng/15μL)
1
10
11
10
2
20
22
20
3
30
33
30
4
40
44
40
5
50
55
50
6
60
66
60
7
70
77
70
8
80
88
80
9
90
99
90
表
2
引物浓度梯度
Table 2 The concentrations gradient of primer
序号
NO.
引物浓度
(umol/L)
Primer concentrations (umol/L)
序号
NO.
引物浓度
(umol/L)
Primer concentrations (umol/L)
A1
0.05
B1
0.05
A2
0.08
B2
0.08
A3
0.11
B3
0.11
A4
0.14
B4
0.14
A5
0.17
B5
0.17
A6
0.20
B6
0.20
A7
0.23
B7
0.23
A8
0.26
B8
0.26
A9
0.29
B9
0.29
表
3 SRAP
所用引物序列
Table 3 The primer sequences used in SRAP analysis
编号
Code
正向引物
Forword primers
编号
Code
反向引物
Reverse primers
me4
5'TGAGTCCAAACCGGACC3'
em6
5'GACTGCGTACGAATTAAC3'