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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1162
-
1166
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1162
-
1166
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1162
研究报告
A Letter
农杆菌介法将耐盐基因
HAL1
转入玉米自交系
H99
的研究
孙传波
,
郭嘉
,
陶蕊
,
李海华
,
孟凡梅
,
曲文利
,
韦正乙
,
刘文国
,
袁英
吉林省农业科学院生物技术研究中心
,
长春
, 130033
通讯作者
: chuanbosun@163.com;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
22
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0022
收稿日期：
2010
年
12
月
22
日
接受日期：
2011
年
02
月
18
日
发表日期：
2011
年
02
月
28
日
这是一篇采用
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引用格式：
孙传波等
, 2011,
农杆菌介法将耐盐基因
HAL1
转入玉米自交系
H99
的研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.22 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0022)
摘
要
通过农杆菌介导法将耐盐基因
HAL1
转入玉米自交系
H99
中，同时研究了愈伤组织状态、农杆菌浓度、侵染时间
和真空压力等因素对转化频率的影响。结果表明：继代
5 d
的愈伤组织、菌液浓度
OD
600
为
0.6
和
0.05 Mpa
真空压力侵染时
间
15 min
为最佳转化条件。通过该优化体系获得的转基因植株
18
株，经
PCR
分析鉴定，其中
9
株表现阳性，初步证明外
源基因已经整合到玉米基因组中。
关键词
农杆菌介导
;
HAL1
;
抗性愈伤
;
转化体系
Study on
Agrobacterium Tumefaciens
Mediated Transformation of
Salt-Tolerance Gene
HAL1
into Maize Inbred Line H99
Sun Chuanbo , Guo Jia , Tao Rui , Li Haihua , Meng Fanmei , Qu Wenli , Wei Zhengyi , Liu
Wenguo , Yuan Ying
Center of Agri-Biotechnology, Jilin Academy of Agriculture Sciences, Changchun, 130033, P.R. China
Corresponding author, chuanbosun@163.com;
Authors
Abstract
The
HAL1
gene was transferred into maize inbred line H99 by
Agrobacterium tumefaciens
mediated transformation.
Factors influencing transformation efficiency were studied: including callus state, bacterial concentration, infection time and vacuum
pressure. Results show that callus subculture for 5 days, bacterium concentration (OD
600
=0.6), 0.05 Mpa vacuum pressure and 15
minutes infection time were the optimal conditions. 18 transgenic plants were obtained by the optimal system. The result of PCR
amplification indicated that 9 of they were positive and the target gene was integrated into maize genome.
Keywords
Agrobacterium tumefaciens
mediated;
HAL1
; Resistant calli; Transformation system
研究背景
玉米
(
Zea mays
L.)
是三大粮食作物之一，在我
国农业生产中占有重要地位，转基因玉米的研究也
因此受到普遍重视。自从首次获得玉米转基因完整
植株以来
(Rhodes., 1988)
，玉米遗传转化技术得到了
较大的发展，利用现代生物技术进行玉米品种改良
的研究已日趋深入。目前玉米的遗传转化方法主要
有基因枪法和农杆菌转化法
(
袁英等
, 2006)
，农杆
菌作为一种天然的植物基因转化系统，具有转化的
外源
DNA
结构完整、转化机理清楚、整合位点较稳
定、拷贝数低、遗传稳定性好等优点。在国外通过
农杆菌转化法获得了很多稳定的转基因玉米
(Gould
et al., 1991; Ishida
et al., 1996; Huang
et al., 2004)
，在
国内也建立了农杆菌介导的玉米遗传转化体系
(
黄
璐等
, 1999)
。
干旱、盐碱等逆境条件严重影响玉米的生产，
利用转基因技术来改善玉米的抗逆性一直是生物
学家的重要研究内容。
HAL1
为细胞离子平衡调节
因子，其过表达使细胞内
K
+
浓度提高
Na
+
浓度降低，
提高细胞对盐的耐受性
((Rios et al., 1997; Yang et al.,
2001)
。国外率先将
HAL1
基因导入甜瓜
(Bordas
et al.,
1997)
，提高了转基因植株在组织培养条件下的耐盐
性，随后
HAL1
基因在番茄、烟草和水稻等植物中也
得到了表达
(
田吉林等
, 2003; Rohila et al., 2002)
，耐