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刘莉等
, 2011,
小麦抗叶锈基因
Lr1
、
Lr9
、
Lr10
、
Lr19
的
STS
标记在近等基因系
(NILs)
上的特异性验证
,
分子植物育种
Vol.9 No.21 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0021)
1160
图
4
Lr19
的
PCR-STS
扩增结果
注
: M: DL2000 marker; 1
-
54:
顺序为表
1
所示顺序
,
箭头所指为
130 bp
Figure 4 Amplification products of marker STS specific to
Lr19
gene
Note: M: DL2000 marker; 1
-
54: reforent Thatcher near-isogenic lines (from No1 to No54 showing in Table1), Arrow shows the 130 bp
band
本研究将近等基因系材料扩大到
54
个，从而在
更广单一抗性品种范围内验证了
STS
标记的稳定性
与特异性。验证结果表明与小麦抗叶锈基因
Lr9
、
Lr10
、
Lr19
连锁的
STS
标记特异性较好且稳定可靠，
扩增产物片段大小分别为
Lr9
1 100 bp
、
Lr10
310 bp
、
Lr19
130 bp
。验证结果说明了
Lr9
1 100 bp
、
Lr10
310
bp
和
Lr19
130 bp
分子标记可以用于小麦抗叶锈基
因的分子标记辅助选择育种，为分子标记辅助选择
和抗病育种提供了理论和技术支持，进一步说明特
异
PCR
产物的扩增是可用于自动筛选抗叶锈基因的
简便且稳定可靠的方法之一。
Lr1
的
STS
PTAG
分子标记的扩增产物除在其亲
本出现外，在其它的
53
个近等基因系中也都扩增
出了与亲本同样大小的条带，说明抗叶锈基因
Lr1
的
STS
PTAG
分子标记无特异性，不能用于分子标记
辅助选择育种，需要寻找与其连锁的其它特异性引
物或寻找更好的其它方法来研究。
3
材料与方法
3.1
实验材料
供试的
53
个以春小麦
Thatcher
为遗传背景的
近等基因系及品种
Thatcher
种子提供单位及扩增、
电泳排序参照
(
刘莉
, 2008,
私人通讯
)
。
3.2
实验方法
3.2.1 DNA
提取
参照
(
刘莉
, 2008,
私人通讯
)
一文中所用方法进
行
DNA
提取及
PCR
扩增、扩增产物电泳。
3.2.2
引物序列
根据报道，由上海生工生物工程技术服务有限
公司合成与
Lr1
、
Lr9
、
Lr10
、
Lr19
连锁的
STS
标
记的引物序列
(
表
1)
。
表
1 STS
或
SCAR
的引物序列
Table1 Primer sequences of STS or SCAR markers for leaf rust resistance genes
基因
Gene
引物代号
Marker set.
引物序列
(5
'
-
3
'
)
Sequence of primer (5
'
-
3
'
)
参考文献
Reference
Lr1
PTAG621
-
5
PTAG621
-
3
GGG TCA CGT ACT ACT ATA TA
CCT TGC CAG CCC AAAAGAAG
Feuillet et al., 1995
Lr9
J13/1
J13/2
TCC TTT TAT TCC GCA CGC CGG
CCA CAC TAC CCC AAA GAG ACG
Schachermayr et al., 1994
Lr10
Fl.2245
Lr10
-
6/r2
GTG TAA TGC ATG CAG GTT CC
AGG TGT GAG TGA GTT ATG TT
Feuillet et al.,1995
Lr19
GbF
GbR
CAT CCT TGG GGA CCT C
CCA GCT CGC ATA CAT CCA
Prins et al., 2001
3.2.3 PCR
扩增
PCR
扩增所用仪器、试剂、反应体系及琼脂糖
凝胶电泳所用仪器、试剂等参照
(
刘莉
, 2008,
私人
通讯
)
。不同引物组合的
PCR
反应程序见表
2
。