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刘莉等
, 2011,
小麦抗叶锈基因
Lr1
、
Lr9
、
Lr10
、
Lr19
的
STS
标记在近等基因系
(NILs)
上的特异性验证
,
分子植物育种
Vol.9 No.21 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0021)
1159
1.2
Lr9
的
PCR-STS
结果
用与春小麦
Thatcher
为背景的
54
个近等基因
系材料对
Lr9
的
STS
Lr9
-J13
标记进行检测，扩增产物
用
1.5%
琼脂糖凝胶进行电泳
(
图
2)
，结果表明与
Lr9
连锁的
STS
Lr9
-J13
标记成功地从近等基因系中扩增
出与报道大小相同的
1 100 bp
的
DNA
片段，且该
片段仅在含有
Lr9
植株
DNA
中得到表达，重复试
验结果相同，证明与
Lr9
紧密连锁的
STS
Lr9
-J13
标记
的稳定可靠，且特异性较好，可作为分子辅助选择
标记用于分子育种
。
图
2
Lr9
的
PCR-STS
扩增结果
Figure 2 Amplification products of marker STS specific to
Lr9
gene
注
: M: DL2000 marker; 1
-
54:
顺序为表
1
所示顺序
,
箭头所指为
1 100 bp
Note: M: DL2000 marker; 1
-
54: reforent Thatcher near-isogenic lines (from No1 to No54 showing in Table1), Arrow shows the
1 100 bp band
1.3
Lr10
的
PCR-STS
结果
用与
Lr10
连锁的
STS
引物在以春小麦
Thatcher
为背景的
54
个近等基因系材料
DNA
中进行扩增，
扩增结果琼脂糖凝胶电泳监测表明
(
图
3)
，第
10
泳
道的
TcLr10
植株
DNA
中扩增出了一条片段大小为
310 bp
的条带，在其他
52
个近等基因系材料和春
小麦
Thatcher
中未扩增出任何片段，且该片段大小
与报道相同，证明该
STS
标记具有选择特异性。
图
3
Lr10
的
PCR-STS
扩增结果
注
: M: DL2000 marker; 1
-
54:
顺序为表
1
所示顺序
,
箭头所指为
310 bp
Figure 3 Amplification products of marker STS specific to
Lr10
gene
Note: M: DL2000 marker; 1
-
54: reforent Thatcher near-isogenic lines (fromNo1 to No54 showing in Table1), Arrow shows the 310 bp band
1.4
Lr19
的
PCR-STS
结果
用
54
个供试小麦基因组
DNA
作为模板，用与
Lr19
连锁的
STS
Lr19
-Gb
引物在
Bio-metraPCR
扩增仪
中进行扩增，重复试验三次，扩增结果如图
4
所示，
在
54
个基因组
DNA
中，只有位于
22
泳道的
TcLr19
植株
DNA
中扩增出了一条
130 bp
的片段，片段大
小同报道相同，说明
STS
Lr19
-Gb
标记具有单一连锁
特异性，可作为分子辅助选择标记用于目的基因的
选择。
2
讨论
传统小麦基因鉴定方法如系谱推导、单体分
析基因定位、抗谱分析、寄主与病原互作产生的
侵染型分析等方法，技术要求较高，影响因素多，
实际操作有局限性，尤其在亲本遗传背景不清楚
或鉴定和筛选含两个以上基因的材料时尤为复
杂。利用与特定基因紧密连锁的分子标记追踪基
因，可使目的基因的鉴定摆脱上述因素带来的困
难且结果更加准确可靠。分子标记辅助育种可在
种子或幼苗期鉴定，利用与目的基因紧密连锁、
稳定单一诱到的分子标记进行品种的筛选及聚合
育种，能够大大缩短世代间隔及育种年限，提高
基因回交转移速度的效率。