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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1864
-
1869
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1864
-
1869
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1864
研究报告
A Letter
丽穗凤梨
ISSR-PCR
反应体系的优化和确立
葛亚英
,
张飞
,
王炜勇
,
沈晓岚
,
刘建新
,
张智
浙江省农科院花卉研究开发中心
,
杭州
, 311202
通讯作者
:
gyy954002@126.com;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
119
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0119
收稿日期：
2011
年
11
月
04
日
接受日期：
2011
年
11
月
30
日
发表日期：
2011
年
12
月
02
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
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件的使用与传播。
引用格式
(
中文
)
：
葛亚英等
, 2011,
丽穗凤梨
ISSR-PCR
反应体系的优化和确立
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.119 pp.1864-1869 (doi: 10.5376/ mpb.cn.2011.09.0119)
引用格式
(
英文
)
：
Ge et al., 2011, Optimization and establishment of ISSR-PCR reaction system of
Vriesea
Bromeliads, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant
Breeding) Vol.9 No.119 pp.1864-1869 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0119)
摘
要
为建立适宜丽穗凤梨
DNA
的
ISSR-PCR
扩增体系，本文采用单因子试验对影响
ISSR-PCR
反应的各组分
(
Taq
DNA
聚合酶
,
模板
DNA,
引物
, dNTPs
和
Mg
2+
浓度
)
进行了优化，确立了适合丽穗凤梨的条带清晰、多态性高、重复性好的最佳
ISSR-PCR
反应体系，即在
20 μL PCR
反应体系中含有
10× PCR Buffer 2.0 μL
、
25 mmol/L MgCl
2
1.2 μL
、
10 mmol/L dNTPs
0.4 μL
、
5 U/μL
Taq
酶
0.25 μL
、
10μmol/L
引物
3.0 μL
、
20 ng/μL
模板
1.5 μL
，并利用两条引物
23
个丽穗凤梨品种进行了稳
定性鉴定，为丽穗凤梨的遗传多样性分析及育种工作提供了新的技术支持。
关键词
丽穗凤梨；
ISSR
；单因素试验；体系优化
Optimization and Establishment of ISSR-PCR Reaction System of
Vriesea
Bromeliads
Ge Yaying , Zhang Fei , Wang Weiyong , Shen Xiaolan , Liu Jianxin , Zhang Zhi
Research
＆
Development Centre of Flower, Zhejiang Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou, 311202
Corresponding author, gyy954002@126.com;
Authors
Abstract
To establish ISSR-PCR amplification system suitable for
Vriesea
Bromeliads, effects of five elements,
Taq
DNA
polymerase, template DNA, primer, dNTPs and Mg
2+
concentration, on ISSR-PCR were investigated and the optimum ISSR-PCR
reaction system for
Vriesea
Bromeliads was established with clear band pattern, high polymorphism and good repeatability. The
optimum ISSR-PCR reaction system was a total of 20 μL containing 10× PCR Buffer 2.0 μL, 25 mmol/L MgCl
2
1.2 μL, 10 mmol/L
dNTPs 0.4 μL, 5 U/μL
Taq
polymerase 0.25 μL, 10 μmol/L primer 3.0 μL and 20 ng/μL
DNA 1.5 μL. The established ISSR-PCR
system was verified to be stable and reliable by genotyping 23
Vriesea
Bromeliads with two different primers. The optimal system
will provide a new technical assistance for breeding and genetic diversity analysis of
Vriesea
Bromeliads.
Keywords
Vriesea
; ISSR; Single factor test; System optimization
研究背景
丽穗凤梨系凤梨科
(Bromeliaceae)
铁兰亚科
(Tillandsioideae)
丽穗凤梨属
(
Vriesea
)
植物及其杂交
种的总称，是观赏凤梨的主要类群之一。其具有花
色艳丽、易栽培、花期长和耐荫性强等特点，观赏
价值高，有很好的经济开发前景。然而，目前市场
上畅销的丽穗凤梨品种大多数是国外育成品种，国
内育种研究滞后、自主知识产权品种的缺乏已严重
限制了我国丽穗凤梨产业的健康发展，因此，开展
丽穗凤梨资源遗传多样性和资源鉴定研究，对其资
源保护及新品种培育具有重要意义，而此项研究工
作的前提是建立适合丽穗凤梨的分子标记体系。国
内外有关丽穗凤梨的研究多集中在生产技术
(
王炜
勇等
, 2011)
，地理居群
(Palma-Silva et al., 2009)
等方
面，而对丽穗凤梨种质资源的遗传多样性方面的研
究在国内外尚未见报道。
ISSR ( Inter-simlpe sequence repeat)
是一种简单
重复序列扩增多态性分子标记，是由
Zietkiewicz
等
(1994)
创建的一种
DNA
标记技术，其优点多，不仅