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曾艳等
, 2011, 4
种水仙种质资源的
ISSR
和
AFLP
遗传多样性分析
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.105 pp.1759-1765 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0105)
1761
图
1
三种反应体系效果比较
注
:
反应体系为
20 μL; 1, 2:
常规反应体系
; 3, 4:
单因素优
化反应体系
; 5, 6:
正交设计优化反应体系
Figure 1 Effect comparison of three reaction systems
Note: Reaction system for 20 μL; 1, 2 : Conventional reaction
system; 3, 4: Single factor optimization reaction system; 5, 6:
Orthogonal design optimization reaction system
1.2AFLP
标记分析
试验从
64
对引物中筛选了多态性高、分辨力
强、条带清晰的
8
对引物，对崇明水仙、漳州水仙、
状元水仙以及洋水仙进行了
AFLP
分析，每对引物
组合产生的条带数目不等
(
表
2)
，共扩增得到
328
条清晰可统计的条带，其中多态性条带
258
条，多
态性比率共计
78.7%
；平均每对引物扩增出条带
41
条，具多态性的条带
32.25
条，多态性比率变幅在
67.5%~88.1%
间；其中，引物
5
-
8
产生的条带最少，
共扩增
26
条；引物
8
-
3
扩增出
49
条；引物
5
-
1
在
445 bp
、引物
8
-
1
在
155 bp
、引物
8
-
3
在
278 bp
处
对四种洋水仙
(
胡德山
(
Narcissus
‘Paricutin’ ‘Mount
Hood’),
阳光光盘
(
Narcissus
‘Sun Disc’),
帕里库廷
火山
(
Narcissus
‘Paricutin’),
塔希提
(
Narcissus
‘Tahiti’))
都扩增出特异性条带，而在漳州水仙、崇明水仙、
状元水仙种群均没有扩增出条带
(
图
2)
。
1.3
遗传相似性分析
对
23
个
ISSR
引物产生的扩增片段进行统计计
算出供试材料间的遗传相似系数
(GS) (
表
3)
，分布
在
0.847 8~0.979 9
之间，平均值为
0.90
。漳州单瓣
水仙和漳州重瓣水仙
GS
值为
0.971 3
，崇明单瓣水
仙和崇明重瓣水仙
GS
值高达
0.979 9
，崇明水仙和
漳州水仙平均
GS
值为
0.965
，分析结果表明漳州水
仙和崇明水仙之间的亲缘关系很近，居群间的遗传
分化较小；状元水仙和漳州单瓣水仙的
GS
值为
0.972 1
，与漳州重瓣水仙的
GS
值为
0.953 3
，平均
GS
值为
0.962 7
，达到高度相似；状元水仙和崇明
单瓣水仙的
GS
值为
0.956 3
，与崇明重瓣水仙的
GS
值为
0.942 1
，平均为
0.949 2
。洋水仙四个品种
个体间平均遗传相似系数为
0.88
，表明洋水仙居群
品种间遗传多样性较为丰富；漳州水仙、崇明水仙、
状元水仙三者间的平均
GS
值为
0.965
，表明它们之
间的亲缘关系较近；它们与洋水仙四个品种间的平
均
GS
值为
0.87
，表明三种中国水仙与洋水仙的亲
缘关系相对较远。
同样，对
8
对
AFLP
引物的扩增片段进行统计，
计算出中国水仙与洋水仙的遗传相似系数
(
表
4)
。种
群间的遗传相似系数
(GS)
变幅为
0.261 3~0.633 5
，
平均值为
0.508
。如表
3
和表
4
所示，
AFLP
标记结
果与
ISSR
标记相似，崇明水仙与漳州水仙亲缘较
近，漳州水仙、崇明水仙、状元水仙与洋水仙的亲
缘关系远：漳州单瓣水仙和重瓣水仙
GS
值为
0.633 5
，
崇明单瓣水仙和崇明重瓣水仙
GS
值为
0.588 6
，崇
明水仙和漳州水仙平均
GS
值为
0.615 7
；状元水仙
表
2 AFLP
选择性扩增引物和扩增结果
Table 2 AFLP primer combinations and amplification
编号
引物对
总带数
多态性带数
多态性比率
(%)
Number
Primer pair
Total Number of Bands
Polymorphic Bands
Polymorphism (%)
5
-
1
E-ACA/M-CAA
42
37
88.1
5
-
3
E-ACA/M-CAG
46
36
78.3
5
-
4
E-ACA/M-CAT
38
31
81.6
5
-
8
E-ACA/M-CTT
26
19
73.1
8
-
1
E-ACG/M-CAA
46
38
82.6
8
-
3
E-ACG/M-CAG
49
38
77.6
8
-
4
E-ACG/M-CAT
40
27
67.5
8
-
8
E-ACG/M-CTT
41
32
78.0
总计
328
258
78.7
Total
平均
41
32.25
78.7
Average