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董玉梅等
, 2011,
全雄芦笋泽西骑士
(Jersey Knight)
的离体快繁
,
分子植物育种
(online) Vol.9 No.103 pp.1741-1748 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0103)
1747
的促雄植物激素赤霉素有关。
芦笋具有很高的营养、保健和药用价值，是我
国目前主要创汇作物之一。研究表明芦笋中含有大
量的黄酮类化合物，而具有清除人体中超氧离子自
由基、提高抗衰老和增加机体免疫的能力，所产生
的三萜皂甙有抗肿瘤、降脂等多种功能。因此，随
着越来越多的人们意识到芦笋的保健和药用作用，
芦笋的需求量也将日益扩大。在世界各国，特别是
发达国家及新兴的经济体国家
(
如中国
)
对芦笋的需
求量日益增加，从而促进了芦笋种植逐渐扩大。由
于目前芦笋生产过程中实生种子昂贵、种子发芽率
低
(30%~80%
不等
)
、种苗不足等问题，限制了它的
生产。现采用组织培养技术，对芦笋进行快繁的相
关研究，建立高效的全雄芦笋快繁体系，不但可提
供足够的生产用种，而且为今后芦笋细胞融合、转
基因和细胞工程等方面的研究奠定基础。
3
材料与方法
3.1
实验材料
全雄泽西骑士芦笋幼嫩茎段；基本培养基为
MS
，蔗糖浓度
3%~5%
，琼脂浓度
0.7%
，
Ph 5.8
，
并添加不同浓度激素。
121
℃，
0.1~0.15 kP
下
20 min
进行培养基灭菌；组培材料的培养温度
(25
±
2)
℃，
相对湿度
70%~80%
，光照强度
2 000 Lx
，光照时间
12 h/d
。
3.2
方法
3.2.1
无菌苗的获得
从良种圃选取健康、综合性状好的全雄芦笋泽
西骑士
(Jersey Knight)
植株，切取露出地面但笋尖尚
未分枝的绿色嫩茎为研究材料。以
75%
酒精浸润
1 min
迅速取出，再用
2.5%
次氯酸钠消毒
10~15 min
后倒出，无菌水冲洗
3~5
遍，在超净工作台上接种
于无菌培养基，然后，置于培养室中进行培养。
3.2.2
全雄芦笋不同外植体愈伤组织诱导培养
为建立良好的再生体系，本实验尝试分别以芦
笋嫩茎表皮、髓部和茎段为外植体诱导愈伤组织，
所用培养基中
NAA
设置为
0.5 mg/L
和
1.0 mg/L
两
个水平，
6
-
BA
设置
6
-
BA 0.1 mg/L
，
6
-
BA 0. 5 mg/L
，
6
-
BA 1.0 mg/L
三个水平，
2,4
-
D
设置
2,4
-
D 2.0 mg/L
和
2,4
-
D 5.0 mg/L
两个水平，而激动素
(KT)
设置为
0.5 mg/L
，
1.0 mg/L
，
1.5 mg/L
，
2.0 mg/L
四个水平，
具体的激素配比组合及结果见表
1 (
诱导率
(%)=
出
愈伤数
(
个
)/
接外植体数
(
个
)
×
100%)
。
3.2.3
全雄芦笋愈伤组织再分化培养
不同外植体诱导形成的愈伤组织，形态和颜色
不一，将生长状态好，颜色浅黄到黄绿的愈伤进行
再分化培养。所用培养基中
NAA
为
NAA 0.5 mg/L
和
NAA 1.0 mg/L
两个水平，
6
-
BA
设置
6
-
BA 0 mg/L
，
6
-
BA 0.1 mg/L
，
6
-
BA 0.5 mg/L
，
6
-
BA 1.0 mg/L
四
个水平，
2,4
-
D
为
2,4
-
D 2.0 mg/L
不变，而激动素
(KT)
设置为
0 mg/L
，
0.5 mg/L
两个水平，具体的激
素配比组合及结果见表
2 (
分化率
(%)=(
出芽愈伤数
/
接种愈伤数
)
×
l00%)
。
3.2.4
全雄芦笋茎段诱导侧芽增殖培养
芦笋组培苗形成的另一条途径是直接由带侧
芽的嫩茎，抑制顶端优势，诱导侧芽增殖。所用培
养基中
NAA
设置为
NAA 0.5 mg/L
，
NAA 1.0 mg/L
，
NAA 1.5 mg/L
三个水平，
6-BA
设置
6
-
BA 0.1 mg/L
，
6
-
BA 0.25 mg/L
，
6
-
BA 0.5 mg/L
，
6
-
BA 0.75 mg/L
和
6
-
BA 1.0 mg/L
五个水平，
2,4
-
D
为
2,4
-
D 0 mg/L
，
2,4
-
D 1.0 mg/L
两个水平，而激动素
KT
设置为
0 mg/L
，
0.5 mg/L
两个水平，具体的激素配比组合
及结果见表
3 (
增殖系数
=
新芽数
(
个
)/
接种数
(
个
))
。
3.2.5
全雄芦笋试管苗生根培养
采用增殖培养后产生的健壮丛生的不定芽，长
度
0.5~5 cm
，接种在生根培养基中，诱导芦笋试管
苗生根。所用培养基
(MS, 1/2MS)
中
NAA
设置为
NAA 0 mg/L
，
NAA 0.1 mg/L
，
NAA 0.5 mg/L
三个
水平，
6
-
BA
设置
6
-
BA 0 mg/L
，
6
-
BA 0.1 mg/L
，
6
-
BA 0.25 mg/L
，
6
-
BA 0.5 mg/L
四个水平，
IBA
设
置为
0 mg/L
，
0.5 mg/L
两个水平，而激动素
KT
设
置为
0 mg/L
，
0.05 mg/L
，
0.1 mg/L
三个水平，具体
的激素配比组合见表
4 (
生根率
(%)=
生根苗
(
株
)/
接
种外植体数
)
。
3.2.6
全雄芦笋试管苗炼苗、移栽
试管苗生根后，待根生长到
2~3 cm
时，将试
管苗在移栽前一周打开瓶盖，使小苗逐步适应周围
环境的湿度；再通过一定强度日光锻炼，使小苗从
异养状态过度到自养状态。炼苗
3~5 d
，小心取出
试管苗，洗净根部的培养基和轻轻拽去没能与不定
芽维管束连通的愈伤组织根，移栽到消毒过的营养
基质中并保持一定的温度和湿度。所用的移栽基质
为腐殖土、垤石、沙。三种基质的不同配比对苗试
管移栽成活率的影响结果见表
5 (
成活率
(%)=
成苗
数
(
株
)/
移栽数
(
株
)
×
100%)
。