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分子植物育种(网络版)
,
2011
年
,
第
9
卷
,
第
1052
-
1056
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1052
-
1056
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1052
研究报告
A Letter
牡丹花芽休眠解除过程中实时定量
PCR
内参基因的选择
张玉喜
,
盖树鹏
,
刘春英
,
穆平
,
郑国生
青岛农业大学生命科学学院
,
青岛
, 266109
通讯作者
:
gszheng@qau.edu.cn;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
7
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0007
收稿日期：
2010
年
08
月
31
日
接受日期：
2011
年
12
月
26
日
发表日期：
2011
年
01
月
26
日
这是一篇采用
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,
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引用格式：
张玉喜等
, 2011,
牡丹花芽休眠解除过程中实时定量
PCR
内参基因的选择
,
分子植物育种
Vol.9 No.7 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0007)
摘
要
以牡丹不同低温处理时间的花芽为研究对象，应用实时定量
PCR
技术，探讨了
β-actin
，
b-tubulin
，
α-tubulin
和
60S-L
11
4
个候选内参基因的表达情况。经
GeNorm
程序分析，
4
个候选内参基因的表达稳定性各异，四者的稳定性由高到低依次为
为
β-actin>b-tubulin>60S-L
11
>α-tubulin
，根据内参基因标准化因子的配对差异分析
(V
n/n+1
)
，判定内参基因的最适数目为
2
，因
此可以使用表达相对稳定的
β-actin
和
b-tubulin
作为牡丹实时定量
PCR
中的内参基因。同时，以筛选的持家基因为内参基因
分析牡丹脱水素基因的表达水平，结果表明，脱水素基因参与了牡丹内休眠解除的整个过程，且在休眠解除前期呈上调趋势，
且以两组引物为内参基因引物得到的脱水素基因的表达水平变化趋势是一致的，因此，所筛选的内参基因是合适的。
关键词
牡丹
;
内参基因
; GeNorm
程序
;
实时定量
PCR;
脱水素基因
Selection of Control Genes in Real-time qPCR Analysis during Bud Dormancy
Release in Tree Peony (
Paeonia suffruticosa
)
Zhang Yuxi , Gai Shupeng , Liu Chunying , Mu Ping , Zheng Guosheng
Qingdao Agriculture University, College of Life Science, Qingdao, 266109, P.R. China
Corresponding author, gszheng@qau.edu.cn;
Authors
Abstract
The bud controlled by different time at 10 temperture in Tree peony (
Paeonia suffruticosa
) was used as test materials to
analyze its expression of four candidate control genes (β-actin, b-tubulin, α-tubulin and 60S-L
11
) by using real-time quantitative PCR
(real-time qPCR). According to the analysis by GeNorm programmer, the expression stability of the four control genes tested was
different with the order of β-actin>b-tubulin>60S-L
11
>α-tubulin. On the basis of the V
n/n+1
of the normalization factor, β-actin and
b-tubulin were assumed to be suitable internal control genes. At the same time, the expression of dehydrin gene was analyzed, and
the results indicated that the variation trends of dehydrin gene using β-actin and b-tubulin as control genes were extraordinary
consensus during bdu dormancy release of tree peony. Therefore, both β-actin and b-tubulin selected as internal control genes were
appropriate.
Keywords
Paeonia suffruticosa
; Internal control genes; GeNorm program; Real-time qPCR; Dehydrin gene
研究背景
以荧光定量检测为基础的实时荧光定量
PCR
(real-time quantitative PCR
或
QPCR)
技术，实现了
PCR
从定性到定量的飞跃，为样品中靶标序列的精
确定量提供了一种便捷的方法。在植物实时荧光定
量
PCR
的研究中多用持家基因作为内参基因，如
18S rRNA
，
3
-磷酸甘油醛脱氢酶基因
(GAPDH)
，转
录延伸因子基因
(EF
-
1α)
，多聚泛素酶基因
(UBQ)
，
β
-肌动蛋白基因
(β-actin)
，微管蛋白基因
α-tubulin
和
b-tubulin
等
(Spinsanti et al., 2006; Pombo-Suarez et
al., 2008; Infante et al., 2008; Yan et al., 2006)
。稳定
的内参基因对反应进行校正和标准化可以增加该
方法的敏感度、重复性和动态范围。但是最近一些
研究结果表明，并不是所有的内参基因基因在不同
细胞类型和不同生理状态下的表达恒定不变，有时
甚至差别很大
(Suzuki et al., 2000; Bustins A, 2002;
Dheda et al., 2004)
。
牡丹
(
Paeonia suffruticosa
Andr.)
是中国传统名
花之一，具有极高的观赏价值。牡丹花芽的休眠是
典型的内休眠，每年冬季进入休眠状态花芽，必须