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Guo et al., 2011, Rapid Acquirement of Transgenic Rice Plants Derived
from Callus of Mature Embryos Transformed by Agrobacterium Mediation, Molecular Plant Breeding (online) Vol.2 No.2 (doi: 10.5376/mpb.2011.02.0002)
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图3 除草剂筛选愈伤组织和植株再生
注: 1: 稻成熟胚的愈伤组织; 2: 21天光照培养后的愈伤组织;
3: 除草剂筛选分化中的愈伤组织; 4: 抗性苗生根; 5: 再生
抗性苗
Figure 3 Selection of phosphinothricin-resistant callus and
plant regeneration
Note: 1: Callus induced from rice mature embryo; 2: The callus
cultured after 21days light culture; 3: The callus screened by
PPT resistance; 4: The rooting plant with PPT-resistance; 5:
regeneration of PPT-resistant plants
图4 转基因植株的GUS组织化学检测
注: 1: 转化植株叶片; 2: 转化植株根部; 3: 非转化植株叶片;
4: 非转化植株根部
Figure 4 GUS active transgenic plant by histochemical staining
Note: 1: GUS active transgenic leaf; 2: GUS activie transgenic
root; 3: Negative control of untransformed leaf; 4: Negative
control of the untransformed root
关于使用单蒸水浸泡和去除胚乳处理，林拥军
等(1996) 认为水稻成熟种子内部具有一套休眠的具
缓冲作用的调节系统。去除水稻成熟种子的胚乳部
分，则打破了该系统的稳定缓冲能力，进而吸收培
养基中高量生长素，促使其系统内各细胞脱分化为
愈伤组织。使用单蒸水浸泡，可能是促进成熟种子
图5 转基因植株的PCR 检测
注: 1: DL2000 marker; 2- 3: 质粒pCAMBIA0390; 4: 空白对
照(ddH2O); 5: 非转化植株; 6: 转化植株
Figure 5 The transgenic plant identified by PCR
Note: 1: DL2000 marker; 2- 3: Plasmid pCAMBIA0390; 4: Blank
(ddH2O); 5: The non-transformed control; 6: Transgenic plant
系统内各细胞从原有的休眠状态恢复到积极的分化
状态。另外，笔者认为也有可能是使用升汞消毒后
汞对外植体造成了一定的毒害，到后期会影响外植
体的愈伤诱导，使用单蒸水浸泡和去除胚乳处理后，
外植体的毒害程度降低，愈伤诱导率得到了提高。
分化前的光照培养是提高愈伤组织分化率的
方法之一(段承俐等, 2001)。本实验的遗传转化过程
中除去了继代步骤，而且研究也发现愈伤组织经过
继代会降低其分化率。最终结果证明除去继代步骤
在短时间内也可获得转化植株。侵染前愈伤组织最
好选取颜色鲜黄、呈颗粒状、表面干燥的胚性愈伤
组织，并且培养皿内已有个别愈伤产生了绿点。这
样的愈伤组织胚性很好，很易分化。
饥饿处理和轻微失水等干燥处理有利于愈伤
组织分化(鲁玉柱等, 2008; Masayoshi et al., 1992)，
该过程中可能引起了愈伤细胞的一些生理、生化变
化，促进对外源激素的吸收。采用在超净工作台内
风干时间不宜过长，应根据愈伤组织状态而定，时
间最好控制在30分钟以内，因为在此环境中愈伤的
脱水速度很快，时间稍长，绝大部分愈伤就会因失
水死亡。另外，有报道显示，在培养基的内部形成
高渗环境也能对水稻愈伤组织进行有效的干燥。比
如，通过提高培养基琼脂糖浓度、加人一定浓度的
甘露醇、山梨糖醇等。
本研究使用的选择标记Bar基因来自土壤吸水链
霉菌(Streptomyces hygroscopieus )，编码膦丝菌素乙
酰转移酶(Phosp-hoinothricin) ，乙酰转移酶在植物的
氮代谢过程中抑制谷氨酞胺合成酶的活性，破坏植
物的光合作用，导致植物氨积累，最终中毒死亡(赵