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分子植物育种
(
网络版
), 2010
年
,
第
8
卷
,
第
9
篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.9
http://mpb.
5th
.sophia
p
ublisher.com
第
5
页，共
10
页
集样品、回收扩增片段及引物特异性方面往往导致侧
翼序列与水稻基因组序列匹配性地，少数序列与植株
样品不对应。为了验证本研究获得的侧翼序列的正确
性，我们通过设计一条和插入位点附近的基因组序列
特异匹配的引物与
Tos17
边界的特异的引物匹配对样
品进行
PCR
扩增，如果目的位点确实存在
Tos17
的插
入，那么就会扩增出预期大小的目的条带
(
图
6A)
，从
而初步证实
Tos17
在该植株中的插入位点。
表
2. Tos17
突变表型和突变频率
Table 2 Summary of Tos17 insertional mutant phenotypes in T
1
families
突变表型
Mutant phenotype
突变家系数
Mutant serial No
突变频率
Mutant frequency
矮化
Dwarf
42
2.23%
不育
Sterility
22
1.17%
白化
Albino
12
0.64%
晚抽穗
Late heading date
9
0.47%
黄化
Yellow leaf
9
0.47%
穗退化
Degenerated panicle
5
0.26%
米粒短圆
Short grain
2
0.11%
分蘖角度变大
Large tiller angle
2
0.11%
分蘖减少
Less tillers
2
0.11%
棒状穗
Malformed panicle
2
0.11%
叶片卷缩
Curled leaf
1
0.05%
短穗
Short panicle
1
0.05%
图
5.
部分突变体表型
注
: A:
矮化
; B:
穗退化
; C:
不育
; D:
单分蘖
; E:
穗短小
; F:
外稃退化
Figure 5 Examples of mutant phenotypes
Note: A: Dwarf; B: Degenerated panicle; C: Sterility; D,
Uniculm; E: Short panicle; F: Malformed glumes
选取已有
Tos17
的侧翼序列的
10
个家系共
12
个
插入位点进行了检测，其中有
10
的插入位点证实是
正确的，
Tos17
在不同家系中的插入位点如表
3
所示。
图
6B
为其中一个家系
08Z11AO40 PCR
扩增片段的
电泳胶图。在
08Z11AO40
中，
Tos17
插在第
6
染色体
的一个基因
LOC_Os06g09430
内，在插入位点
Chr6:
4787186
上下游各选取
1 Kb
，设计基因特异引物
AO40R (5' AGGAGGGCAGGAAGTGA3')
，和
Tos17
特异引物
TRB1
配对进行
PCR
扩增。在
08Z11AO 40
家系的
T
1
代
7
个单株中，有
5
个单株扩增出了
500bp
左右的预期条带，说明这
5
个单株在该位点含有
Tos17
标签；另外
2
株没有扩增出预期条带，说明它们是在
T
1
代中分离出的该位点野生型基因型。