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分子植物育种
(
网络版
), 2010
年
,
第
8
卷
,
第
4
篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.4
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
共
6
页，第
5
页
为感病。白粉病
E15
菌种由中国农业科学院李洪杰
博士提供。
3.4
总
DNA
的提取
按照
SDS-
酚法提取植株幼嫩叶片的
DNA
(Devos et al., 1993)
。
3.5 PCR
扩增及电泳检测
反应体系为
15 μL
，扩增程序使用降落
PCR
(touchdown PCR)
，扩增结束后
10
℃保存
(
袁园园等
,
2010)
。扩增反应所用仪器为美国
Bio-Rad
公司生产
的
9600 Thermal Cycler
型热循环仪。扩增产物经
8%
非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳，硝酸银染色。
3.6
标记分析
选用优选小群体分析法进行分析
(Hao et al.,
2008)
，即选择典型的抗病单株
10
株
(
即白粉病级别
为
0
或
0;
型的单株
)
和典型的感病单株
10
株
(
白粉病
级别为
4
型的单株
)
分别提取总
DNA
，然后进行
PCR
扩增和电泳分析，寻找抗感性状
(
表现型
)
和扩增带
型
(
基因型
)
基本一致的标记
(
选取标准参见宗浩等
,
2009)
，然后进一步在
F
2
分离群体中进行验证，计算
所筛得标记与基因
(
Pm21
)
之间的连锁遗传距离。利
用卡方检验
(χ
2
)
，确定分离群体中观测值和期望值
的符合度。微卫星标记与基因
Pm21
间的遗传距离用
JoinMap
软件进行计算，最后用
MapDraw
绘制遗传
连锁图谱
(
刘仁虎等
, 2003)
。
作者贡献
作者亓晓蕾对本项研究做了主要贡献，包括最初的实
验设计、引物的查询与合成、实验数据的分析及论文初稿的
写作等；作者崔法参与了实验数据的初步处理和论文初稿的
修改工作；作者余利参与了整个实验的过程；作者丁安明参
与了实验数据的处理工作；作者李君与陈桂玲参与了实验的
初步准备工作；作者王洪刚协调本项实验的顺利进行并参与
了实验设计与论文的修改工作。所有作者均已阅读和赞同本
文的最终稿。
致谢
感谢师兄郝元峰在本文论最初的构思中提出了非常有
用的建议；感谢师妹包黎明与吴瑕在本实验过程中给予了大
力帮助，使实验顺利完成；感谢陈孝研究员惠赠小麦种质
CB033
，为本实验提供了实验材料；感谢李洪杰博士提供了
白粉病
E15
病菌，使本实验得到了准确的抗感分离结果。
本 实 验 所 用 的 标 记 均 来 自
GrainGenes2.0 (http://
wheat.pw.usda.gov/)
及相关文献
(
文章中有说明
)
，并均由上海
生工生物工程有限公司合成；本实验所用的
10×PCR Buffer,
dNTPs and
Taq
酶均由大连宝生物工程有限公司合成。中国
农业科学院对本研究的部分工作给予了一定的支持，在此表
示衷心的感谢。本论文所有权归山东农业大学所有，在此非
常感谢
国家自然科学基金
(30771349)
的资助。
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