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分子植物育种
(
网络版
), 2010
年
,
第
8
卷
,
第
15
篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.15
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
第
4
页，共
6
页
图
3 Cef
和
Cb
对细胞系
109
增殖生长的影响
Figure 3 Effects of Cef and Cb on proliferation of cell line 109
2
讨论
2.1
落叶松胚性细胞系对
Km
的敏感性反应
落叶松胚性细胞系对
Km
反应比较敏感。在较
低浓度
(10 mg/L)
的
Km
作用下，各细胞系生长不良，
当培养基中
Km
浓度≥
25 mg/L
时，胚性组织全部死
亡。
Km
的作用下各细胞系的组织增殖率明显低于
对照，且与对照存在显著的差异。
3
种细胞系对
Km
的敏感性反应不同。细胞系
113
对
Km
作用反应最敏感，
109
次之，
638
相对来说
不太敏感，对
Km
的耐受临界浓度分别为
15 mg/L
、
20 mg/L
、
25 mg/L
。在其他研究中也表明，不同基
因型的外植体对
Km
敏感性存在差异。如范正琪等
(2005)
对不同浓度
Km
作用下
2
种油茶愈伤组织敏感
性反应的研究表明，浙江红山茶对
Km
的敏感性高
于大花红花油茶。
Km
对浙江红山茶的致死浓度为
50 mg/L
，而对大花红花油茶愈伤组织的致死浓度为
60 mg/L
。
与其他植物的胚性细胞系相比，落叶松胚性细
胞系对
Km
反应更加敏感。通过以上分析，
3
种落叶
松细胞系对
Km
的耐受临界浓度在
10
-
25 mg/L
范围
内，低于其他植物胚性细胞系对
Km
的耐受临界浓
度。如黄天带等
(2008)
研究
Km
对巴西橡胶树花药愈
伤组织生长与分化的影响，得出
Km
为
50 mg/L
时完
全抑制组织的生长，但不致死。郑树松等
(2002)
的
相关研究表明，
Km
对棉花愈伤组织的生长具有抑
制作用，浓度大于
50 mg/L
时，愈伤组织增长量变化
不再明显。胡桂兵等
(2001)
用不同浓度的
Km
处理台
湾青枣茎段愈伤组织生长，通过实验发现即使是用
含
50 mg/L Km
的培养基对胚性组织进行继代培养，
也无法将外植体全部杀死。由此看来，落叶松胚性
细胞系相对于其他植物来说，对
Km
的反应比较敏
感，这可能与针叶树自身生物特性有关。
另外，值得指出的是在遗传转化中，转化体由
于已经受到伤害，在耐受临界浓度的
Km
的作用下很
难恢复生长从而导致转化率降低，因此筛选培养基
中
Km
的浓度应稍低于细胞系的
Km
耐受临界值。
2.2
不同抑菌抗生素对细胞系生长的作用
本文关于
Cef
和
Cb
对落叶松细胞系生长的影响
的研究表明，
2
种抗生素对细胞系生长作用不同，
Cef
促进胚性细胞系
109
的生长，而
Cb
则抑制其生长，
因此对于胚性细胞系
109
为受体的遗传转化研究，
Cef
是比较合适的抑菌抗生素。其他关于
Cef
和
Cb
对
植物材料生长影响的研究中有不同的结果。如康薇
等
(2008)
研究发现
Cef
对刺槐离体培养的外植体毒性
比
Cb
大，
Cb
只在高浓度
(500 mg/L)
才对不定芽的分
化有抑制作用。郑树松等
(2002)
研究发现
Cef
和
Cb
对棉花下胚轴切段诱导的愈伤组织生长没有明显的
影响。因此，抑菌抗生素对植物材料生长的影响作
用因植物类型不同而存在差异。
通过本研究，明确了不同抗生素对部分落叶松
胚性细胞系生长的影响，给落叶松遗传转化研究中
筛选抗生素及抑菌抗生素和其浓度的使用提供了参
考，为遗传转化工作的顺利进行奠定了基础。
3
材料与方法
3.1
材料
采用生长优良的落叶松胚性细胞系
638(
日本落
叶松
,
Larix leptolepis
)
、
109(
长白落叶松
,
L. olgensis
)
、
113(
日本落叶松
,
L. leptolepisi
)
作为供试材料。
3
种胚
性细胞系均为从辽宁省大孤家落叶松种子园采集的
材料利用齐力旺
(2000)
关于华北落叶松体细胞胚胎
发生的技术经过诱导和多次继代培养获得的胚性
组织。
3.2
培养基
诱导及继代基本培养基为
S(Ewald et al., 1996)
；
诱导培养基为
S+VB
1
0.5 mg/L+BA 0.4 mg/L+2,4
-
D