Basic HTML Version
分子植物育种
(
网络版
), 2010
年
,
第
8
卷
,
第
15
篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.15
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
第
5
页，共
6
页
1.1 mg/L+KT 0.4 mg/L
，继代培养基为
S+B(HBO
3
由
S
的
3.1 mg/L
增加至
7.5 mg/L)+VB
1
0.5 mg/L+BA
0.4 mg/L+2,4
-
D 0.4 mg/L
；另外两种培养基中再添
加谷氨酰胺
450 mg/L
，酸水解酪蛋白
500 mg/L
，肌
醇
1 g/L
，蔗糖
30 g/L
，琼脂
(Sigma
#
)3g/L
，
pH5.8
。
3.3
试验方法
本研究中筛选抗生素为
Km
，试验对象为胚性
细胞系
638
、
109
、
113
。将各细胞系胚性组织均接
种于添加
Km
的继代培养基上进行培养。培养基中
Km
浓度分别为
10 mg/L
、
15 mg/L
、
20 mg/L
、
25 mg/L
、
30 mg/L
、
35 mg/L
，以不添加抗生素为对照，共
7
个
处理。各细胞系每个处理设置
5
个重复
(
即分别接种
5
个培养皿
)
，每个重复接种约
1.0 g
胚性组织。
抑菌抗生素为
Cef
和
Cb
，试验对象为胚性细胞系
109
。继代培养基中添加
Cef
或
Cb 300
、
400
、
500 mg/L
，
以不添加抗生素为对照，共
7
个处理。其他试验方法
同上。
Km
和
Cb
均购于北京欣经科生物技术有限公司，
Km
为
Merck
分装，
Cb
为国产分装。
Cef
购于北京鼎
国昌盛生物技术有限公司国产分装。
Km
经无菌水溶
解配制
50 mg/ml
的母液，过滤灭菌后于-
20
℃保存。
Cef
和
Cb
瓶装粉末
4
℃保存。培养基高压灭菌后冷却
至约
60
℃时添加所需抗生素备用。
3.4
试验统计分析
30 d
后观察记录胚性组织状态及再生情况，统
计处理前后接种组织重量并计算胚性组织增殖率
(
以下称组织增殖率
,
计算方法见下面公式
)
，数据使
用数理统计软件
SPSS 16.0
进行统计分析。
组织增殖率
(%)=(
处理后组织重量-接种重量
)/
接种重量×
100
作者贡献
朱彩虹、栗婷是本研究的实验设计和实验研究的执行
人；朱彩虹完成结果分析，论文初稿的写作；韩素英指导实
验研究的实施；齐力旺是项目的负责人，指导实验设计，结
果分析，论文写作与修改。全体作者均已阅读并同意论文最
终文本。
致谢
本研究由国家“
973
”项目
(2009CB119100)
，国家自然
科学基金重点项目
(30830086)
，国家“
863
”项目
(2006AA10-
0109, 2007AA10Z182, 2008AA10Z126, 2007AA100105)
和国
家林业局
948
项目
(2007-4-03)
资助。
参考文献
Chen Y., He Q.L., Zhuge Q., Huang M.R., and Wang M.X., 2006,
Recent advances in forest-tree gene engineering, Fenzi
Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding), 4(1): 1-7 (
陈
英
,
何秋伶
,
诸葛强
,
黄敏仁
,
王明庥
, 2006,
林木基因
工程研究进展
,
分子植物育种
, 4(1): 1-7)
Chen S.Y., Chen F., Wang Y.B., and Chen S.N., 2006, Advances
and applications in genetic transformation of conifers, Shijie
Linye Yanjiu (World Forestry Research), 19(2): 12-17 (
陈
少瑜
,
陈芳
,
王寅冰
,
陈善娜
, 2006,
针叶树种遗传转化
研究进展与应用
,
世界林业研究
, 19(2): 12-17)
Cerda F., Aquea F., Gebauer M., Medina C., Medina C., and Arce-
Johnson P., 2002, Stable transformation of
Pinus radiata
embryogenic
tissue by
Agrobacterium tumefaciens
, Plant
Cell, Tissue and Organ Culture, 70(3): 251-257
Ewald D., and Kretzschmar U., 1996, The influence of microg-
rafting in vitro on tissue culture behavior and vegetative
propagation of old European larch trees, Plant Cell Tissue
and Organ Culture, 44(3): 249-252
Fan Z.Q., Li J.Y., and Tian M., 2005, Effect of antibiotics on
induction and growth of camellia callus, Linye Kexue
Yanjiu (Forest Reseach), 18(2): 183-186(
范正琪
,
李纪元
,
田敏
, 2005,
抗生素对山茶愈伤组织诱导和生长的影响
,
林业科学研究
, 18(2): 183-186)
He B.W., Yue C.W., and Zhang Y.Z., 2009, Study on callus differ-
entiation and antibiotic resistance of sweet potato, Zhongguo
Nongxue Tongbao (Chinese Agricultural Science Bulletin),
25(9): 140-143 (
何博文
,
岳昌武
,
张义正
, 2009,
甘薯愈
伤组织分化及抗生素耐受性研究
,
中国农学通报
, 25(9):
140-143)
Hiei Y., Ishida Y., Kasaoka K. and Komari T., 2006, Improved
frequency of transformation in rice and maize by treatment
of immature embryos with centrifugation and heat prior to
infection with
Agrobacterium tumefaciens
, Plant Cell, Tissue
and Organ Culture, 87(3): 233-243
Huang T.D., Li Z., Sun A.H., Hua Y.W., and Huang H.S., 2008,
Effects of antibiotics on growth and somatic embryogenesis