医学检验检疫杂志
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
2
篇
,
第
7
-
14
页
Yixue Jianyan Jianyi Zazhi (Online), 2012, Vol.1, No.2, 7
-
14
7
研究报告
Research Report
H5N1
亚型
AIV HA
抗原表位的高效表达及其抗原活性分析
庞耀珊
1
,
谢丽基
1
,
邓显文
1
,
谢志勤
1
,
刘加波
1
,
谢体三
2
,
谢芝勋
1
1
广西壮族自治区兽医研究所
,
广西畜禽疫苗新技术重点实验室
,
南宁
, 530001;
2
南宁市蓝光生物技术有限公司
,
南宁
, 530007
通讯作者
:
作者
医学检验检疫杂志
, 2012
年
,
第
1
卷
,
第
2
篇
doi:10.5376/jmiq.cn.2012.01.0002
收稿日期：
2012
年
04
月
26
日
接受日期：
2012
年
07
月
18
日
发表日期：
2012
年
07
月
20
日
本文首次发表在《基因组学与应用生物学》
(2012
年第
31
卷第
2
期
109
-
116
页
)
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(
中文
)
：
庞耀珊等
, 2012,
H5N1
亚型
AIV HA
抗原表位的高效表达及其抗原活性分析
,
医学检验检疫杂志
(
online) Vol.1 No.2 pp.7
-
14 (
doi:
10.5376/
jmiq.cn.2012.01.0002)
引用格式
(
英文
)
：
Pang et al., 2012,
High Level Expression and Antigenic Analysis of H5N1 AIV Hemagglutinin Epitopes, Yixue Jianyan Jianyi Zazhi (online) Vol.1 No.2
pp.7
-
14 (
doi: 10.5376/jmiq.cn.2012.01.0002)
摘 要
血凝素
(
hemagglutinin, HA)
蛋白是禽流感病毒
(
avian influenza virus, AIV)
的一个重要表面抗原性蛋白，在疾病诊断
和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的
HA
重组蛋白表达途径，利用生物信息学软件，对
H5N1
亚型
AIV HA
基因编码的氨基酸序列进行分析，在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗
原性等重要特性后，构建了
HA
抗原表位重组表达质粒
pET
-
32
a(+)-HA
。
经测试，该重组质粒在
1
mmol/L IPTG
诱导剂作
用下诱导过夜，能在大肠杆菌
Rosetta-gami B (DE3)
中高效表达，并得到
48.1
kD
大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用
6
×His-tagged protein
纯化试剂盒纯化后，与福氏佐剂等量混合制备成抗原，以
200
μg/
鸡的剂量皮下注射
2
月龄
SPF
鸡
3
次，
采血分离血清。
Western-Blot
试验结果表明，该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及
H5N1
亚型
AIV
阳性血清发
生特异性反应，在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的
HA
抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反
应原性，保留了
HA
蛋白的抗原活性，提示该重组蛋白在
H5
亚型
AIV
的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。
关键词
禽流感病毒
(
AIV); H5N1
亚型
;
抗原表位
;
表达
High Level Expression and Antigenic Analysis of H5N1 AIV Hemagglutinin Epitopes
Pang Yaoshan
1
,
Xie Liji
1
,
Deng Xianwen
1
,
Xie Zhiqin
1
,
Liu Jiabo
1
,
Xie Tisan
2
,
Xie Zhixun
1
1
Guangxi Veterinary Research Institute, Nanning, 530001;
2
Nanning Languang biotechnology Inc, Nanning, 530007
Corresponding author,
Authors
Abstract
Hemagglutinin (HA) is an important surface antigen protein of avian influenza virus (AIV), and plays an important role
in diagnosis, prevention and treatment of AIV. The purpose of this study is to develop an easier and more efficient way to express
HA recombinant protein. The open reading frame (ORF) of H5N1 AIV HA gene was analyzed using bioinformatics software. Its
codon bias to
Escherichia coli
,
rare codon’s contributions in the sequence and the antigenicity of HA protein were used to construct a
recombinant expression plasmids of HA epitopes, pET
-
32
a (+)-HA. When these recombinant plasmids were induced overnight with
1
mmol/L IPTG solution, they could be highly expressed in
E. coli
Rosetta-gami B (DE3), and the desired recombinant proteins of
48.1
kD could be got. After purified by 6×His-tagged protein purification kit, the recombinant proteins were mixed with equal amount
of Freund’s Adjuvant Complete/Incomplete to make the antigen. Then every seven days this antigen was hypodermically injected
into two-month-old SPF chickens with a dose of 200 μg per chicken, totally three times. Serums were collected from chickens after
last injection. Western-Blot results showed that the recombinant protein could hybridize with both the serum from the highly-
immunized chicken and the serum from H5N1 AIV positive chicken. Specific bands were present on the nitrocellulose membrane.
This indicates that the recombinant protein expressed by HA antigen gene segment has great immunogenicity and antigenicity and
keeps the antigen activity of HA protein. This study suggests that the recombinant protein has practical value in the diagnosis,
prevention and treatment of H5N1 AIV.
Keywords
Avian influenza virus (AIV); H5N1 subtype; Epitope; Expression
