昆虫分子生物学研究
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
2
篇
,
第
8
-
15
页
Kunchong Fenzi Shengwuxue Yanjiu (Online), 2012, Vol.1, No.2, 8
-
15
14
洗净晾干，浸入制备好的菌体蛋白提取液中
20
s
左右，
注意需将叶片正反两面都均匀的浸入菌体蛋白提
取液中
10
s
，
然后将叶片放在生测室中阴干，再放
入生测培养皿中，每个生测培养皿放
30
只小菜蛾，
无菌水作为空白对照，控制生测室的温度
25
±1
℃，
光照周期为
14
h
光照
/10
h
黑暗，相对湿度控制为
60%
左右，
72
h
后，观察幼虫的生长情况，计算出
最终的校正死亡率。
3.11
生物测定半致死浓度
(
LC50)
的分析
采用浸叶法对小菜蛾进行半致死浓度
(
LC50)
测定
(
谢柳等
, 2009;
张文飞等
, 2009;
Crespo et al,
2008)
，
需把供试菌株的蛋白溶液浓度分别稀释到
几个浓度，起始浓度的标定需要做几次尝试，待发
现某一浓度下试虫死亡率较高时，则可用作起始浓
度，然后把该浓度的蛋白稀释到
5
个浓度，每个浓
度设置
3
个平行实验组，每一组放置
30
只小菜蛾。
以这
6
个浓度的伴胞晶体溶液进行小菜蛾的半致死
浓度测定
,
分别用无菌水和
HD
-
73
蛋白作为阴性对
照和阳性对照，
72
h
后记录试虫的死亡数，计算出
校正死亡率，然后使用
SPSS 19.0 for Window
软件中
的
Probit
模块
(
概率单位回归
)
求出各个供试菌株的
半致死浓度
(
LC50)
。
3.12
生物测定半致死时间
(
LT50)
的测定
杀虫活性的半致死时间
(
LT50)
的测定按照
Yang
等
(2007)
的方法进行
,
以致死浓度
(
LC98)
的数
值作为处理剂量对小菜蛾进行处理
,
每隔
8
个小时
记录一次小菜蛾死亡的幼虫数，每个处理设
3
个平
行实验组，记录到
72
h
为止，分别用无菌水和
HD
-
73
蛋白作为阴性对照和阳性对照。计算不同处理时间
段内的小菜蛾幼虫的校正死亡率
,
使用
SPSS 19.0
for Window
软件中的
Probit
模块
(
概率单位回归
)
求
出各个供试菌株的半致死时间
(
LT50)
。
作者贡献
梁照东是本研究的实验研究执行人；周燕、钟昊参与了
试验结果分析、论文的修改；李有志指导实验设计，数据分
析，论文修改和写作。全体作者阅读并同意最终的文本。
致谢
本研究受本研究受中国
Bt
收集与鉴定项目的资助。作
者感谢方宣钧老师给予本研究的指导以及对文章修改时所
提出的宝贵意见；感谢海南省热带农业资源研究所的黎仲刚
为小菜蛾人工养殖提供的帮助；部分研究工作是在广西大学
李有志教授实验室完成；感谢匿名的同行评审人的评审建议
和修改建议。本文中提到了我们实验中涉及的有关试剂仪器
供应商，这并非我们为这些试剂仪器供应商的产品和服务提
供推荐或背书。
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