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基因组学与医学生物学
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
3
篇
,
第
18
-
22
页
Jiyinzuxue Yu Yixue Shengwuxue (Online), 2012, Vol.1, No.3, 18
-
22
http://gmb.5th.sophiapublisher.com
22
DNA Polymerase (5 units/μL)
，
72
℃延伸
20 min
，为
融合基因加上
Poly A
尾，以利于下一步的
TA
克隆。
用
2%
琼脂糖凝胶电泳检测
PCR
产物，凝胶成像系
统观察并拍照。
3.4
重组质粒
HTPP-MDC/pMD20
-
T
的构建及鉴定
用
TIANgel Midi Purification Kit
回收目的片段
后，与
pMD20
-
T
载体连接构建重组质粒
HTPP-
MDC/pMD20
-
T
，转化
E. coli
DH5a
感受态细胞进行
蓝白斑筛选，挑取阳性克隆培养后进行菌落
PCR
鉴
定。取初步鉴定为阳性的克隆菌液，用
TIANpure Midi
Plasmid Kit
抽提质粒，抽提的质粒用限制性内切酶
Kpn
I
、
Hin
d
Ⅲ进行双酶切鉴定，并委托
Invitrogen
公
司进行
DNA
测序分析。
3.5
融合基因的分子特征分析
利用互联网上的在线工具对获得的融合基因
编码蛋白进行分析。用蛋白质基本性质分析工具
ProtParam Tool (http://www.expasy.org/tools/ protparam.
html)
对
HTPP-MDC
基因编码蛋白的分子量、氨基
酸序列组成和等电点等理化性质进行分析；用疏水
性分析软件
ProtScal
程序
(http://web.expasy.org/cgi-
bin/protscale.pl)
分析其亲水性
/
疏水性；用
SignalP 3.0
Server (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP)
分析其
是否存在信号肽，用
PSORT
Ⅱ
Prediction (http://psort.
hgc.jp/form2.html)
对其亚细胞定位进行预测分析，
用
sopma (http://npsa-pbil.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_sopma.
pl)
预测其二级结构和折叠类型。
作者贡献
卢雪梅完成了主要实验操作和文章初稿的写作；黄演婷
和汪洁协助细菌培养和质粒提取；金小宝和朱家勇负责文章
的修改、审阅和完善。
致谢
本研究由国家自然科学基金
(30671832)
资助。感谢褚夫
江博士对本文的指导。
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