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基因组学与医学生物学
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
3
篇
,
第
18
-
22
页
Jiyinzuxue Yu Yixue Shengwuxue (Online), 2012, Vol.1, No.3, 18
-
22
http://gmb.5th.sophiapublisher.com
18
研究报告
Research Report
肝靶向穿膜肽与家蝇天蚕素基因的融合及其分子特征分析
卢雪梅
1,2
,
黄演婷
1,2
,
金小宝
1,2
,
汪洁
1,2
,
朱家勇
1,2
1
广东药学院药用生物活性物质研究所
,
广州
, 510006;
2
广东省生物活性药物研究重点实验室
,
广州
, 510006
通讯作者
: zhujy@gdpu.edu.cn;
作者
基因组学与医学生物学
, 2012
年
,
第
1
卷
,
第
3
篇
doi: 10.5376/gmb.cn.2012.01.0003
收稿日期：
2012
年
04
月
02
日
接受日期：
2012
年
05
月
18
日
发表日期：
2012
年
06
月
29
日
本文首次发表在《基因组学与应用生物学》
(2012
年第
31
卷第
3
期第
226-230
页
)
上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用
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,
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引用格式
(
中文
)
：
卢雪梅等
, 2012,
肝靶向穿膜肽与家蝇天蚕素基因的融合及其分子特征分析
,
基因组学与医学生物学
(online) Vol.1 No.3 pp.18-22
(doi: 10.5376/gmb.
cn.2012.01.0003)
引用格式
(
英文
)
：
Lu et al., 2012, Construction and Molecular Characteristics of Fusion Gene HTPP-MDC
,
Jiyinzuxue Yu Yixue Shengwuxue (online) (Genomics and
Medical Biology) Vol.1 No.3 pp.18-22 (doi: 10.5376/gmb.cn.2012.01.0003)
摘 要
本研究利用改进
SOE-PCR
技术构建肝靶向穿膜肽
(HTPP)
与家蝇天蚕素
(MDC)
融合基因并对其分子特征进行了预测
和分析。结果表明：成功融合了
HTPP
与
MDC
，并构建了
HTPP-MDC
融合基因的克隆重组质粒
HTPP-MDC/pMD20
-
T
。
PCR
和
Kpn
Ⅰ
/Hin
d
Ⅲ双酶切结果显示获得与预期大小一致的基因片段，测序结果显示获得的基因序列没有发生突变，与预
期完全一致。分子特征分析表明，该融合基因编码
60
个氨基酸，分子量为
6 516.2 Da
，理论等电点为
9.31
，二级结构主要由
α-
螺旋、无规则卷曲、延伸链和
β-
转角组成。研究结果为
HTPP-MDC
后续的功能研究奠定了基础，同时也为应用
SOE-PCR
技术构建融合基因提供了有益借鉴。
关键词
肝靶向穿膜肽
;
家蝇天蚕素
; SOE-PCR;
分子特征
Construction and Molecular Characteristics of Fusion Gene HTPP-MDC
Lu Xuemei
1,2
, Huang Yanting
1,2
, Jin Xiaobao
1,2
, Wang Jie
1,2
, Zhu Jiayong
1,2
1 Institute of Pharmaceutical Bioactive Substances, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou, 510006;
2 Guangdong Key Laboratory of Pharmaceutical Bioactive Substances, Guangzhou, 510006
Corresponding author: zhujy@gdpu.edu.cn;
Authors
Abstract
A
novel fusion gene combining
hepatocyte
-targeted cell penetrating peptide
(HTPP)
with
Musca domestica
cecropin
(MDC)
was constructed by improved SOE-PCR.
The molecular characteristics of HTPP-MDC were analyzed with bioinformatics
analysis software. The results show that the fusion gene HTPP-MDC and recombinant plasmid HTPP-MDC/pMD20
-
T
were constructed successfully. The results of PCR amplification and restriction endonuclease
Kpn
Ⅰ
/Hin
d
Ⅲ
digesting show
that the acquired gene fragment is as long as what have been expected. DNA sequencing confirms that the sequence of
HTPP-MDC is identified with the sequences of
HTPP
and
MDC
reported in GenBank. The analysis of molecular
characteristics indicates that HTPP-MDC is cationic molecule containing 60 amino acids withthe theoretical PI of 9.31 and the
molecular weight of 6 516.2 Da. The second structure of HTPP-MDC contains α-helix, random coil, extended strand and β-turn. This
research could provide foundation for further study on the biological activity of HTPP-MDC, and give useful reference for
constructing fusion gene with SOE-PCR.
Keywords
Hepatocyte-targeted cell penetrating peptide;
Musca domestica
cecropin; SOE-PCR; Molecular characteristics
肝靶向穿膜肽
(hepatocyte-targeted cell penetrating
peptide, HTPP)
来源于恶性疟原虫环子孢子蛋白。研
究发现
HTPP
可特异性结合肝细胞表面的受体，与人
肝癌细胞
HepG 2
具有高亲和力
(80 nmol/L) (Garcia
et al., 2006; Suarez et al., 2001)
。
HTPP
还能够有效穿
透肝细胞膜，介导环子孢子蛋白进入肝细胞内部，
实现细胞亚定位
(De Koning-Ward et al., 2009)
。
抗菌肽
(antimicrobial peptides, AMP)
是一类小