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基因组学与医学生物学
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
1
-
6
页
Jiyinzuxue Yu Yixue Shengwuxue (Online), 2012, Vol.1, 1
-
6
http://gmb.5th.sophiapublisher.com
5
3.5
表达条件的优化
目的基因的表达主要受三种条件的影响：诱导
温度、
IPTG
的浓度、诱导时间。大肠杆菌生长的
最适温度是
37
℃。首先在
37
℃条件下，选取不同
的
IPTG
的浓度：
0 mol/L
、
0.1 mol/L
、
0.2 mol/L
、
0.3 mol/L
、
0.4 mol/L
、
0.5 mol/L
、
0.8 mol/L
、
1 mol/L
诱导表达
3 h
。选取表达量最高的
IPTG
的浓度。在
此浓度下，
37
℃诱导表达
1 h
、
2 h
、
3 h
、
4 h
、
5 h
、
6 h
、
7 h
进行
SDS-PAGE
电泳及凝胶成像系统
UVP-GDS8000
分析，确定最适诱导表达条件。
3.6Western Blotting
检测
Western blotting
将
SDS
聚丙烯酰胺凝胶电泳的高
分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。首先是蛋白
质的电泳分离，然后将电泳后凝胶上的蛋白质转移至
PVDF
膜上，用非特异性，非反应活性分子封闭固体
膜上未吸附蛋白质区域，最后进行免疫学检测。其中
一抗为鼠源组氨酸标签，二抗为
HRP
标记兔抗鼠标签。
配置显影定影液将
PVDF
膜上的印记在暗室中转至胶
片上。
3.7
目的基因的纯化
根据亲和层析原理，目的基因
C
段含有
His
标签，
能与
Ni
特异性相结合。将菌体破碎后上清缓慢通过上
样柱，最后进行梯度洗脱。收集洗脱峰后进行
SDS-PAGE
电泳，分析结果。
作者贡献
通讯作者李智博以及杨君负责本研究的实验设计及安
排，第一作者孙莉负责论文整个实验的具体实施及分析，其
他作者均参与了本实验的研究工作。
致谢
感谢大连理工大学和大连海洋大学同组老师和同学们
的支持和帮助。感谢两位匿名的同行评审人的评审意见和修
改建议。
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