基因组学与生物技术
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
7
篇
,
第
40
-
44
页
Jiyinzuxue Yu Shengwu Jishu (Online), 2012, Vol.1, No.7, 40
-
44
44
体
pBUC3
连接，电转化表达宿主苏云金芽孢杆菌
无晶体突变株
IPS
中。在含有氨苄青霉素
(100
ug/mL)
和四环素
(50
ug/mL)
的
LB
培养基平板进行重组子
筛选，用
PCR
扩增鉴定阳性克隆。验证后的阳性克
隆子接种到
LB
固体培养基培养
12
h
后，显微镜观
察其伴胞晶体产生情况，最后用
7.5%
胶进行
SDS-
PAGE
电泳分析验证表达情况。
鉴定
cry1Ac
基因的通用引物为
K2
-
5/
K2
-
3
序
列：
K2
-
5
：
5’-
AGGACCAGGATTTACAGGAGG-3’;
K2
-
3
：
5’-
GCTGTGACACGAAGGATATAGCCAC-3’
。
Bt
菌株电转化感受态制备及电转化参考分子克隆
实验指南
(
Sambrook et al., 1989)
；
显微镜观察方法
参照谢柳等
(2009)
的方法，
SDS-PAGE
电泳分析方
法参照
(
Liu et al., 2010)
。
作者贡献
刘辰是本研究的实验设计和实验研究执行人；张文飞和
周燕参与数据分析，论文写作与修改；李有志指导实验设计，
试验结果分析和论文修改和写作。全体作者都阅读并同意最
终的文本。
致谢
本研究受本研究受中国
Bt
收集与鉴定项目的资助。本研
究的部分工作是在李有志教授的实验室完成的，感谢该实验
室在过程中的技术支持和有益的建议。感谢两位匿名的同行
评审人的评审建议和修改建议。本文中提到了我们实验中涉
及的有关试剂供应商和测序服务商，这并非我们为这些试剂
供应商和测序服务商的产品和服务提供推荐或背书。
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