分子植物育种
(
网络版
), 2016
年
,
第
14
卷
,
第
1048-1054
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2016, Vol.14, 1048-1054
Copyright © 2016 BioPublisher 1052
另外，
3
个辐照处理后的辐照群体聚在一起，也表
明其遗传关系很近，它们的遗传变异主要来源于辐
照。从聚类图可看出，虽然辐照处理辐照群体先聚
成一支再和对照辐照群体相聚，但辐照群体间遗传
距离总体还是比较小的，说明这
4
个辐照群体其实
总体还可以认为是一个辐照群体。
2.2
种子辐照处理在草莓选育中的可行性
吴伟民等采用
30~80 Gy
剂量的γ射线辐照
5
个草莓品种的匍匐茎植株，对辐照结果进行了研
究，结果表明，且各品种的死亡率均有随着剂量增
加而提高的趋势
(
吴伟民等
, 2007)
。张慧琴等以丰香
草莓的无根无菌苗为试材，研究了γ射线辐射对草
莓叶片再生及植株继代增殖的影响。结果表明，其
叶片对辐射敏感，半致死剂量为
10
～
20 Gy (
张慧琴
等
, 2007a)
。张慧琴等以
20~100 Gy
射线辐照处理丰
香试管苗辐射诱变育种试验。试验结果表明各处理
对草莓植株的生长和发育均有影响，丰香半致死剂
量约为
55 Gy (
张慧琴等
, 2007b)
。而本研究是对种
子进行辐照，并对辐照后的种子进行发芽，未涉及
其致死情况。
经分析可知，
62
个样本共得
19
个单倍型，其
中有
18
个均为辐照后出现的，从它们在各辐照群
体中的分布看，中高剂量辐照处理所获得的单倍型
更多。各单倍型
UPGMA
聚类图，可以看出有很多
的变异性比较大的单倍型存在，这些单倍型表现了
较高的遗传多样性，选取这些具有较高遗传多样性
的个体，对其进行后期性状的评价，再结合相关性
状参数，最终将可以作为很好的育种材料。研究结
果同时认为对种子进行辐照处理可以为草莓选育
提供一个可操作的手段，可以作为草莓选育的前期
筛选工具。
3
材料与方法
3.1
供试草莓品种材料
试验的研究材料是于阜阳市农科所提供的，种子
经
60 Gy
、
100 Gy
和
150 Gy
，
3
个剂量的γ射线
(60Co)
辐照处理后，进行培育，共选取
60
份
(
每个剂量
20
份
)
单株形成三个辐照群体，以其为试验材料，未处
理丰香草莓单株
2
份为实验对照
(
表
7)
。草莓样品要
进行处理，在摘取的两天前要对样品进行遮光
,
然后
摘取草莓未展开的嫩叶，把采下的嫩叶装在样品袋
中，做好标记后立即置于冰盒内，带回实验室，再用
蒸馏水冲洗一遍，晾干后放在
-20
℃的冰箱中备用。
表
7
草莓样本信息
Table 7 Samples of Strawberry used in this study
编号
No.
辐照群体
Populations
样品数
Numbers
1
60Gy
射线辐照
60Gy-ray irradiation
20
2
100Gy
射线辐照
100Gy-ray irradiation
20
3
150Gy
射线辐照
100Gy-ray irradiation
20
4
未辐照处理对照
No irradiation
2
3.2 DNA
提取
取叶片用植物基因组
DNA
提取试剂盒提取总
DNA
。超微量分光光度计
(Thermo Nano Drop 2000)
检 测 浓 度 均 在
100-300 mg/μL
范 围 ， 纯 度
OD260/OD280
的比值均介于
1.7~2.0
之间，
0.7%
琼
脂糖凝胶电泳检测
DNA
大小和完整性，可用于
ISSR
分析。稀释浓度至
50 mg/μL
，
-20°C
保存备用
(Nie et al., 2014)
。
3.3 PCR
扩增及引物筛选
最佳
PCR
反应体系优化：总体积
20 μL
，
含
10×PCR Buffer (
含
Mg
2+
) 2.0 μL
、
DNA
模板
(50 mg/μL) 1 μL
、
dNTP (2.5 μmol/L) 1.6 μL
、引物
(10 μmol/L) 1.2 μL
、
Taq
DNA
聚合酶
(2.5 U/μL) 0.4 μL
，
加
ddH
2
O 13.8 μL
。
扩增程序
(
安娜等
, 2009;
陈大霞等
, 2007)
：
94
℃
预变性
5 min
；
94
℃变性
40 s
，退火
60 s (
退火温度随
引物而定
)
，
72
℃延伸
1.5 min
，共
35
个循环；最后
72
℃延伸
7 min
。
PCR
扩增在
BIO-RAD T100TM
Thermal Cycler PCR
仪上完成。电泳条件：
1.5%
的琼
脂糖凝胶上电泳
(1.0×TAE
，
100V)
分离，溴化乙啶
(EB)
染色显带
(Mchandrika et al., 2010)
。
DNA
片段通过凝
胶成像系统
(Alpha Innotech)
观察记录。
3.4
数据分析与处理
ISSR
电泳图谱按
Weising
的方法将有条带或弱
带记“
1
”、无条带记“
0
”，转化为
0/1
矩阵的二
元数据计算多态性
(Nie et al., 2012)
。用
POPGENE
v1.32
软件将处理好的图谱数据进行相关分析：计
