基本HTML版本
基因组学与生物技术
(
网络版
), 2014
年
,
第
3
卷
,
第
1-
页
Jiyinzuxue Yu Shengwu Jishu (Online), 2014, Vol.3, 1-6
http://gb.biopublisher.cn
2
次电子
) 3.0 nm at 30 kv
，
8.0 nm at 3 kv
；低真空
(
低
真空二次电子
)
﹕
3.5 nm at 30 kV
；放大倍数
:
1~1000000×
；真空系统
:
低真空
3~2000 Pa
。
图
1
扫描电镜
(
型号
: TESCAN VEGA 3)
Figure 1 Scanning electron microscopy (Model Number:
TESCAN VEGA 3)
2
培养基、化学试剂及配制
本实验用的酵母粉、琼脂糖、氯化钠
、四氧
化锇、六甲基二硅胺烷等均购于国内各个生物试
剂公司。
LB
、
NB
培养基配方及制备参照
Zhou
等
(Zhou et al., 2013)
。
3
实验流程
3.1
准备样品
具体样品制备方法参照
Zhang
等
(Zhang et al.,
2012)
。
3.2
样品处理
(1)4
℃，
12000 g
离心
10 min
收集
500 μL
菌体。
(2)
用预冷的
1 M NaCl
洗涤菌体
3
次。
(3)
最后将菌体悬浮于
500 μL
预冷的超纯水中。
(4)
取
10 μL
芽孢和晶体的混合物小心平铺在洁净
的盖玻片上，
4
℃低温真空干燥。
(5)
固定：用
1%
四氧化锇
(OsO
4
)
进行样品固定。
(6)
将固定后样品置于金属样品台。
3.3
样品观察
(1)
镀膜：在真空镀膜喷金仪中对金属样品台进行
金属镀膜，镀金厚度约
20~30 nm
。
(2)
扫描电镜观察：型号
TESCAN VEGA 3
，工作
电压
30.0 kV
，工作距离
9.0~9.8 nm
，观察并
拍照。
4
例证分析
Bt
最主要特征就是在生长后期产生芽孢和伴
孢晶体，因此在这个时期用扫描电子显微镜来观
察其形态是最佳的。本案例中，我们以
Bt
分离株
S3299-1 (Fang et al., 2011)
为实验材料，锇酸固定
法对生长后期的
Bt
菌进行扫描电镜鉴定。如图
2
结果显示，在
SEM HV 30.0 kV View field: 7.223
μm WD: 7.313 mm 30.00 kx
观察条件下，能清晰
观察到
S3299-1
菌株的芽孢以及产生的菱形晶体。
图
2
Bt
S3299-1
菌株的扫描电镜观察
Figure 2 Micrographs of
Bt
S3299-1 observed under
scanning electron microscope
5
注意事项
首先，待观察的菌体要培养到芽孢完全形成，
即
48~72 h
以上不同的菌株可能不同，保证存在
预期需要观看的内容的材料
其次，四氧化锇
(OsO
4
)
具有挥发性对眼睛、
粘膜、呼吸道有强烈刺激作用，操作时要戴口罩。
第三，由于扫描电子显微镜要求样品必须是
干燥的，因此，样品固定后一定要保证其脱水完
全，以免影响观察结果。
最后，用剪刀剪裁盖玻片时，注意不要使样
品被弄脏，贴的时候也不要反过来，以免影响样
品的观察结果。