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叶春秀等, 2011, 应用 RAPD 分析新疆六个核桃品种的遗传多样性, 分子植物育种 Vol.9 No.43 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0043)
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来自于亲缘关系较近的早实父本或母本，这有待于
进一步研究，而且，通过对引物在母本和F1代上扩
增条带的统计可以看出，在母本上出现的条带在子
代上并不是都出现，子代上有新的条带出现，这说
明核桃基因组是相对较保守的，但也存在着一定程
度上的差异，这可能是由于自然授粉产生了新的变
异，这将有利于得到较丰富的种质资源，对核桃育
种将是珍贵的资源。
2讨论
对于核桃种质资源的分类国际上并没有比较
系统的方法和标准。目前认为核桃种群演化发展的
主要动力是种内个体间及种间的天然杂交和各种
生境下的自然与人为选择( 吴燕民等, 2000)。一些学
者把我国的核桃栽培种分为新疆核桃、华北山地核
桃、秦巴核桃和西藏高地核桃。由此可以看出，新
疆核桃是其中较重要的资源之一。近年来，核桃产
业在新疆得到了较好的发展，成为创收的一部分产
业，但良种和无性系生产的不断扩大使资源遭受了
破坏，使得一些适应性较强的地方品种和野生种逐
渐被淘汰，呈现出单一化。为了改善这种单一化的
局面，对新疆核桃资源进行较全面的研究是比较重
要的，将有助于种质资源的保存于应用，对其进行
种质资源遗传多样性的研究将是核桃新品种选育
的理论基础。
遗传多样性是决定物种发生、进化、选择、重
组和创新的物质基础( 解新明和云锦凤, 2000)(夏铭,
1999)。从分子遗传角度来看，表型的差异归根到底
是基因型和基因组的差异，对这些基因组序列差异
的比较研究为植物系统与进化研究提供了最直接
的依据( 王红霞, 2006)。目前，在遗传多样性研究的
几种标记方法中，分子标记已经成为一种简便、可
靠的鉴定方法，广泛用于核桃遗传多样性的研究。
王宝庆采用 SSR 分子标记技术对四川西部的川毫
和知母群体进行遗传多样性的比较分析发现川毫
铁核桃群体的遗传丰富度高于知母核桃群体，与表
型多样性观察结果一致(王宝庆 , 2007)。郭传友等
(2008)采用 RAPD 分子标记技术对山核桃天然群体
进行遗传结构分析发现大部分的变异存在居群内，
居群间基因交流相对较少，并且地理隔离、居群内
近交及居群间有限的基因交流可能是形成山核桃
天然结构遗传结构的主要因素，研究结果符合山核
桃风媒、异交的繁育系统特点和实际分布情况。邹
雪梅采用 RAPD 对川西南高山峡谷区的核桃资源
(109 个样品)进行遗传多样性进行研究显示该分子
标记产物能够显示核桃丰富的遗传多样性，聚类分
析结果与地理区划基本符合( 邹雪梅, 2006)。本实验
通过采用 RAPD 分子标记技术对新疆的 6 个地方品
种进行多样性的分析，最终可以将这六个核桃品种
的母本分为 3 类，品种 F1 代可以明显地划分为距离
较远的两类，并且在 F1 代之间存在着一定程度上的
基因交流，与母本也存在着差异，这将为保存和育
种提供一定的资源与信息。
3材料和方法
3. 1材料
实验材料为采自新疆轮台资源圃的母本材料
( 材料为当地农民自己嫁接 , 品种名为: 轮 1, 轮 2,
轮 3, 轮 4,轮 5, 轮 6)和种植在石河子大学农学院实
验站 15号网室的 F1代单株( 约 190 株) ，以叶片为试
材，春季待叶片展开后，对每个品种单株采新鲜嫩
叶，提取总DNA。研究所用的 CTAB、PVP 40、EDTA、
Tris碱、Taq DNA聚合酶、dNTPs 、琼脂糖等购自于
上海生物工程技术有限公司，随机引物由北京三博
远志生物有限责任公司合成，其它氯仿、乙醇、异
戊醇、异丙醇等试剂皆为国产分析纯试剂。
3.2方法
3.2.1 DNA 的提取与测定
DNA 提取采用改良 CTAB 法，参照张虎平等
(2003) (Cheng et al., 2003) (Proberki et al., 1997)的
方法并稍加改动，提取的 DNA 经 TE 稀释 100 倍，
用紫外分光光度计测定波长 260 nm 及 280 nm 处的
光吸收值(OD 值) ，确定 DNA 的纯度和浓度，最后
用 TE 稀释为 20 ng/µL 保存在-20 ℃备用。
3.2.2引物筛选及PCR反应体系的确定
通过对张虎平(2003)、邹雪梅(2006)、杨恩(2006)
已筛选出的 55个随机引物进行再次筛选，选取扩增
稳定，重复性好的引物用于试验。
PCR反应体系参照张虎平 (2003)、邹雪梅(2006)
的扩增体系，在试验了各种不同的扩增条件后，获
得了适合于实验的扩增反应体系和循环条件，反应
总体积为25µL，各成分如下：10×Buffer (含Mg2+) 2.5