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乔燕春等：SRAP 标记在丝瓜种质资源研究中的应用
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2讨论
种质资源是新品种选育的基础(罗少波等, 2006,
广东农业科学, (1): 15-17)，丝瓜资源丰富，从表型
上来分主要有有棱丝瓜和普通丝瓜两大类型，有棱
丝瓜又分为长条绿皮有棱丝瓜和大肉瓜两种，为了
从分子水平对丝瓜材料进行评价，本研究利用
SRAP分子标记对31 份丝瓜材料开展了遗传多样性
研究，遗传多样性非常丰富，而且普通丝瓜和有棱
丝瓜的遗传关系较远，本研究认为将普通丝瓜定位
为丝瓜的亚种更合适。而且分子标记和田间表现较
为吻合，说明 SRAP 标记较适合分析丝瓜的遗传多
样性。这与前人利用ISSR ( 苏小俊等, 2010)和SRAP
(崔竣杰等, 2012)分析丝瓜的结果比较接近，而和前
人 RAPD (夏军辉和向长萍, 2008) 的实验结果存在
差异。说明SRAP 标记对丝瓜开展遗传多样性分析
较为适用。本研究中的部分材料如： F- 9 、F-12-2
来自05秋资s-11，E -33 号、F- 2来自06年转-13 的后
代，C-33、C-41-3来自05-M -24 的后代；又如G26、
G36分别来自06 转16 、 06 转12 ，均单独聚类，说明
SRAP标记还适合丝瓜亲缘关系较近材料间的遗传
分析。以上结果可见，SRAP 可以作为丝瓜田间选
育种的有效辅助手段，本研究的结果对丝瓜育种研
究具有重要指导意义。
3材料与方法
3.1 材料
供试材料：丝瓜重要性状资源 31 份，其中 28
份丝瓜为有棱丝瓜，3 份为普通丝瓜；28 份有棱丝
瓜中 18 份丝瓜为长条绿皮有棱丝瓜，长棒形、皮
色深绿；10 份丝瓜为大肉瓜，短棒形、皮色绿白，
有斑点(表 1)。
3.2 方法
3.2.1 DNA 提取
DNA 提取采用改良 CTAB 法，浓度为 2%，参
照陈洁等方法略作改动（陈洁等, 2008, 江苏农业科
学, (5): 61-62, 269）。用 0.8% 的琼脂糖凝胶电泳检测
DNA 的浓度及纯度，将每个样品浓度调至 50 ng/Μl
-20℃备用。
3.2.2 建立丝瓜 SRAP 反应体系
本研究采用均匀设计方案，建立丝瓜 SRAP 反
应体系，首先以普通丝瓜材料为模板，采用正交实
验设计Ｌ16(45)在４个水平上对影响丝瓜 SRAP 反应
的 Taq 酶、Mg2＋、模板、dNTP 及引物等 5 个因素
进行了优化，建立了丝瓜 SRAP-PCR 的最佳反应体
系(乔燕春等, 2008; 李莲芳等, 2011)。
表 1 供试 31 份丝瓜材料
Table 1 A list of names of 31 Loofah
编号
No.
种质
Germplasm
编号
No.
种质
Germplasm
1 Y-17 17 F -9
2 05-DZ-3 18 F -12-2
3 D-15-1 19 A-24
4 D-28-4 20 A-11
5 NEA 21 A-15
6 E-15 22 A-4-2
7 G-24 23 C-11
8 C- (A+B) 24 C-33
9 D-4-1 25 C-41-3
10 2-1-1 26 09-Z-D-4
11 G-26 27 09-Z-D-5
12 E-33 28 DRZH-0
13 F-2 29 6-SG
14 G-36 30 27-SG
15 G-3 31 20-SG
16 G-15
SRAP 扩增程序参照吴红等(2009)并略加优化，
建立的适合本研究的扩增程序为：94℃ 5 min， 1
个循环；94 ℃ 1 min, 35℃ 1 min，72℃ 1.5 min，5
个循环；94 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1.5 min，
35 个循环；72 ℃延伸 8 min。 PCR 扩增完成后，再
在 2%琼脂糖凝胶下电泳 2 h ，检测并拍照。
3.2.3 遗传多样性分析
研究中，将供试的 9 条正向引物和 11 条反向
引物，两两配对组合，组成 99 组引物对，以任意
两份材料为模板，利用 99 个引物组合对材料进行
PCR 扩增，筛选出 20 对稳定扩增的引物组合(表 2)，
对 31 份丝瓜材料进行扩增，进一步在 4%聚丙烯酰
胺凝胶上电泳分析。将 PCR 产物点样在 4%聚丙烯
酰胺上，通过在 0.5×TBE 缓冲液中以 2000 v 电压
电泳 1.0 小时，通过干胶，数据采集、数据分析。
利用 NTSYS2.1 软件对采集数据进行 UPGMA 法聚
类分析，得出 31 份丝瓜材料的遗传距离。
分子植物育种
F enzi Zhiwu Yuzhong